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實(shí)驗(yàn)方法原理    利用星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)存在時(shí)間上的差異、細(xì)胞生長(zhǎng)方式及細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)層黏附性不同等特性，用37℃恒溫?fù)u床從培養(yǎng)的皮層來(lái)源的混合膠質(zhì)細(xì)胞中去除少突膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，其中星形膠質(zhì)細(xì)胞的貼附力強(qiáng)。用這種方法獲得的星形膠質(zhì)細(xì)胞純度很高(95%以上），且細(xì)胞具有較好的增殖能力。
實(shí)驗(yàn)材料    新生2-3d的SD大鼠仔鼠
試劑、試劑盒    含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基D-PBS液消化液(0.25%胰蛋白酶+0.04%的EDTA)
儀器、耗材    37℃恒溫?fù)u床
實(shí)驗(yàn)步驟    
1.培養(yǎng)少突膠質(zhì)細(xì)胞，待10天后細(xì)胞分層，且星形膠質(zhì)細(xì)胞已經(jīng)*鋪滿底層，開(kāi)始純化。

2在37℃恒溫?fù)u床上，固定好培養(yǎng)瓶，以280r/min的速度能搖過(guò)夜，約20h。

3.次日，在顯微鏡下觀察上層細(xì)胞脫落情況，若上層細(xì)胞基本去除干凈，而下層細(xì)胞仍完好貼壁，就可終止純化。棄培養(yǎng)液后按照細(xì)胞傳代的方法將細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中分離出來(lái)并再次接種。分離培養(yǎng)成功的細(xì)胞，沒(méi)有污染，狀態(tài)好，細(xì)胞增殖較快，1周左右能進(jìn)行傳代，而且沒(méi)有太多的雜細(xì)胞。
注意事項(xiàng)    

1.搖床過(guò)夜純化細(xì)胞時(shí)注意用封口膜將瓶口封死，避免污染和漏氣。

2.如果下層細(xì)胞在震搖過(guò)夜后開(kāi)始成片脫壁，應(yīng)及時(shí)終止震搖并開(kāi)始傳代分離培養(yǎng)。

3.硝化后重新接種的星形膠質(zhì)細(xì)胞接種在多聚賴氨酸處理過(guò)的介質(zhì)上，否則細(xì)胞容易聚團(tuán)生長(zhǎng)，狀態(tài)不好。
其他    
1.選擇原代培養(yǎng)用的動(dòng)物時(shí)，是新生2-3d的仔鼠，此時(shí)的皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)較多，且易存活。

2.原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，但應(yīng)確保每次實(shí)驗(yàn)使用的細(xì)胞為同一代次的。

來(lái)源《神經(jīng)生物學(xué)實(shí)用實(shí)驗(yàn)技術(shù)》第四軍醫(yī)大學(xué)出版社