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1、細(xì)胞名稱：Bend.3；小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

2、生長特性：     貼壁   □ 懸浮   □半懸浮半貼壁

3、細(xì)胞生長條件：
培養(yǎng)條件        DMEM(高糖）+10%FBS+1%雙抗
溫度                                    37℃
空氣條件      5% CO2，,95% AIR
傳代方法    建議1:2傳代，2~3天換液
凍存條件    90%FBS+10%DMSO

4、背景資料：該細(xì)胞轉(zhuǎn)染了NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，表達(dá)多瘤病毒中T抗原。血管性血友病因子的分泌和吸收熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白（LDL）證實(shí)了該細(xì)胞株的內(nèi)皮細(xì)胞特性。細(xì)胞因子和脂多糖（LPS）可誘導(dǎo)細(xì)胞分泌MAdCAM-1和E選擇素。TNF-α、IL-1和LPS的誘導(dǎo)是時間和濃度依賴。早代數(shù)的未刺激細(xì)胞會分泌MAdCAM-1和VCAM-1，但找過30代不分泌。細(xì)胞會組成型分泌ICAM-1，并且表達(dá)量會在LPS、IL-1和TNF-α刺激下增多。P選擇素在早代數(shù)和晚代數(shù)細(xì)胞中受TNF-α誘導(dǎo)分泌，但30代后分泌量增加。
二．使用方法
1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：
取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。