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 實時熒光定量PCR擴(kuò)增曲線包括基線期，指數(shù)擴(kuò)增期，線性擴(kuò)增期和擴(kuò)增平臺期，標(biāo)準(zhǔn)的曲線應(yīng)該呈典型的S型。
不規(guī)則曲線可以根據(jù)曲線的具體情況來分析：
1）曲線呈斜線上升
原因：熱蓋失靈或熱蓋沒蓋緊，導(dǎo)致控溫不準(zhǔn)、液體揮發(fā)。
解決辦法:更換儀器熱蓋或?qū)嵘w蓋緊。


圖1 曲線呈斜線上升



2）擴(kuò)增曲線分成兩段（斷裂）

圖2擴(kuò)增曲線分成兩段（斷裂）

原因：基線的終點大于Ct值，通常是因為模板DNA濃度偏高，CT值< 15，而基線仍然取3-15，其中包含部分?jǐn)U增信號，導(dǎo)致曲線被壓下去。
解決方法：減小基線終點，至Ct值前4個循環(huán)，重新分析數(shù)據(jù)。



3）直線擴(kuò)增曲線

圖3 某些樣本出現(xiàn)直線擴(kuò)增曲線

原因：探針部分降解
解決辦法:建議更換試劑進(jìn)行測試。



4）曲線平臺期下掉
原因：蓋子沒蓋緊
解決辦法:PCR反應(yīng)管蓋子蓋上后，檢查蓋子是否蓋緊。


圖4　曲線平臺期下掉