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技術(shù)文章

小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞說明書

閱讀:402          發(fā)布時(shí)間:2019-12-23

一、產(chǎn)品簡介

1. 產(chǎn)品名稱:小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞

2. 組織來源:四肢肌肉組織

3. 產(chǎn)品規(guī)格5×105 cells/T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4. 細(xì)胞簡介

小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分離自四肢肌肉組織;骨骼肌又稱橫紋肌,肌肉中的一種,

約占全身重量的 40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細(xì)胞,肌膜的外面有基膜緊密貼

附。屬于橫紋肌,橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,其中骨骼肌主要分布于四肢。

每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官,有豐富的血管、淋巴分布,在軀

體神經(jīng)支配下收縮或舒張,進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止

點(diǎn)、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。

骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀,不分支,有明顯橫紋,核很多,且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)

胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的

明帶(Ⅰ帶)及暗帶(A帶)。明帶染色較淺,而暗帶染色較深。暗帶中間有一條

較明亮的線稱 H 線。H 線的中部有一 M 線。明帶中間,有一條較暗的線稱為 Z 線。

兩 個(gè) Z 線之間的區(qū)段,叫做一個(gè)肌節(jié)。骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞指骨骼肌中除骨骼肌細(xì)胞

外的 一種扁平、有突起的細(xì)胞。附著于肌細(xì)胞表面;當(dāng)肌細(xì)胞受損后,骨骼肌衛(wèi)星

細(xì)胞 可增殖分化,參與肌細(xì)胞的修復(fù),因此具有干細(xì)胞性質(zhì)。多數(shù)細(xì)胞伸展呈長

梭形, 胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,

高低起 伏;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀。

傳代后 細(xì)胞生長較快,4-6 天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。

本公司生產(chǎn)的小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來,細(xì)胞總量約為

5×105 cells/瓶;細(xì)胞經(jīng) Desmin 免疫熒光鑒定,純度可達(dá) 90%以上,且不含有 HIV-1、

HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5. 培養(yǎng)基信息

我們推薦使用小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞*培養(yǎng)基作 為體外培養(yǎng)小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞

的培養(yǎng)基。

二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照

三、使用方法在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞可傳1-3 代左右,隨著傳代次

數(shù)的增加,細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)老化狀態(tài),生長速度減緩,1 代以內(nèi)細(xì)胞狀態(tài);建議您收

到 細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1.

取出 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用 75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入 37℃、5%CO2、飽

和 濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2.

待細(xì)胞達(dá)到 80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用 PBS 清洗細(xì)胞一次;

2) 添加 0.25%胰蛋白酶消化液 1mL 至培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培

養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴 1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)

胞回縮變圓后,再加入 5ml*培養(yǎng)基終止消化;

3) 用吸管輕輕吹打混勻,按 1:2-1:3 適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*

培 養(yǎng)基至 5mL,置于 37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每隔 2-3 天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

四、注意事項(xiàng)

1.

培養(yǎng)基于 4℃條件下可保存 3-6 個(gè)月。

2.

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作。

3.

傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和

技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí) 和我

們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題 得

到解決。

5.

該細(xì)胞只可用于科研。

備注:由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考

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