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成功的IHC/ICC實(shí)驗(yàn)操作指南（一）
閱讀：754 發(fā)布時(shí)間：2020-1-6細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是科學(xué)研究的基礎(chǔ)，那么IHC/ICC實(shí)驗(yàn)就不可避免。如何設(shè)計(jì)一個(gè)成功的IHC/ICC實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?/strong>從這篇推文中你將找到答案。
設(shè)計(jì)一個(gè)成功的IHC/ICC實(shí)驗(yàn)
免疫組織化學(xué)（IHC）和免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）是用來(lái)定位檢測(cè)抗原表達(dá)的技術(shù)，其主要原理是利用抗原表位和抗體間的相互作用。IHC使用組織切片，而ICC使用培養(yǎng)的細(xì)胞或細(xì)胞懸浮液。后，IHC/ICC均需使用分子標(biāo)記物(熒光或染料)來(lái)得到陽(yáng)性染色結(jié)果。簡(jiǎn)而言之，先固定樣本以保持細(xì)胞完整性，再使用封閉試劑孵育該樣本，以覆蓋抗體可能結(jié)合的非特異性位點(diǎn)，后使用一抗、二抗孵育該樣本，并在顯微鏡下觀測(cè)信號(hào)結(jié)果。
從技術(shù)上講，IHC/ICC是相對(duì)簡(jiǎn)單和直接的實(shí)驗(yàn)方法。然而，每個(gè)IHC/ICC實(shí)驗(yàn)都有多個(gè)需要優(yōu)化的變量。主要的挑戰(zhàn)是針對(duì)不同抗原，如何優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，以產(chǎn)生特異性高且信號(hào)強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。例如，在培養(yǎng)的細(xì)胞上檢測(cè)一種高豐度的蛋白，固定時(shí)間和封閉時(shí)間可能就要縮短，并適合使用熒光偶聯(lián)的一抗檢測(cè)。相反，如果在一個(gè)冰凍組織切片中檢測(cè)磷酸化表位，可能需要進(jìn)行抗原的修復(fù),染色信號(hào)也需要放大。
下表列出了影響IHC/ICC的變量和因素，旨在有助于IHC/ICC實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)、優(yōu)化及疑難的解答。
- 影響實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和優(yōu)化的變量
*這些變量還需要對(duì)額外因素進(jìn)行優(yōu)化包括濃度、pH、溫度、孵育時(shí)間和稀釋度。
該表格并不包含所有細(xì)節(jié)，但是涵蓋了R&D Systems所使用的用的IHC/ICC方法。
