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植物葉綠素、類胡蘿卜素（chlorophyll）含量試劑盒說明書

可見分光光度法

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體500mL瓶，4℃保存（自備，無水乙醇：丙酮=1:2）。 

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。 

測定意義

植物葉綠素、類胡蘿卜素廣泛存在于綠色植物組織中，其含量與光合作用、營養(yǎng)狀況密切相關(guān)，是反應(yīng)植物生長狀況的重要指標。

測定原理

根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長下吸光度的總和。這就是吸光度的加和性。測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的大吸收峰。

自備實驗用品及儀器： 

天平、研缽、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、10mL玻璃試管，錫箔紙。 

操作步驟： 

1.稱取約新鮮植物葉片或其它綠色組織，去掉中脈，稱取約0.1g，剪碎，用蒸餾水洗干凈。 

2.加入1mL蒸餾水，少量試劑一（約50mg），在黑暗或弱光條件下充分研磨，轉(zhuǎn)入10mL玻璃試管。 

3.用提取液沖洗研缽，將所有沖洗液轉(zhuǎn)入玻璃試管，用提取液定容至10mL，玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提3h，觀察試管底部組織殘渣*變白則提取*，若組織殘渣未*變白，繼續(xù)浸提至其*變白。 

4.取浸提液1mL于1mL玻璃比色皿，提取液調(diào)零，測定663nm和645nm處吸光值，分別記為A663和A645 。 

計算公式： 

葉綠素a含量（mg/g）=（12.7×A663 – 2.69 ×A645）×V提×D÷m÷1000 

= 0.01×（12.7×A663 – 2.69 ×A645）×D÷m 

葉綠素b含量（mg/g）=（22.9×A645 – 4.68 ×A663）×V提×D÷m÷1000 

= 0.01×（22.9×A645 – 4.68 ×A663）×D÷m 

葉綠素總含量（mg/g）=（20.21×A645 +8.02 ×A663）×V提×D÷m÷1000 

= 0.01×（20.21×A645 +8.02 ×A663）×D÷m 

類胡蘿卜素濃度（mg/g）=【（1000A470-3.27Ca-104Cb）÷229】×V 提×D÷m÷1000

                      =0.01×【（1000A470-3.27Ca-104Cb）÷229】×D÷m

V提：提取液體積，10mL；D：稀釋倍數(shù)；m：樣本質(zhì)量，g 

注意事項： 

1.葉綠素對光敏感，研磨和提取等操作盡量避光或者在弱光下進行。 

2.一定要浸提至組織殘渣*變白，否則提取不充分。 

3.用提取液沖洗研缽一定要沖洗至所有的綠色物質(zhì)被轉(zhuǎn)移至玻璃試管。 

4.測定時吸光值超過1，可進行適當稀釋。