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技術(shù)文章

肌酐(Cr)檢測(cè)試劑盒(去蛋白終點(diǎn)微板法)

閱讀:917          發(fā)布時(shí)間:2022-3-2

 

肌酐(Cr)檢測(cè)試劑盒(去蛋白終點(diǎn)微板法)

 

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

肌酉酐(creatinine ,Cr)是人體或動(dòng)物肌肉內(nèi)代謝的產(chǎn)物,每20g肌肉代謝可產(chǎn)生約1mg肌酐,由腎小球?yàn)V過(guò)排出體外,外源性肌酐是肉類食物在體內(nèi)代謝后的產(chǎn)物,內(nèi)源性肌酐是體內(nèi)肌肉組織代謝的產(chǎn)物。

雅吉生物肌酐(Cr)檢測(cè)試劑盒(去蛋白終點(diǎn)比色法)檢測(cè)原理是肌酐與鹽發(fā)生Jaffe反應(yīng),生成橘紅色的苦肌酐復(fù)合物,該復(fù)合物生成量與肌酐含量呈正比,通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定510nm 處吸光度,可用于檢測(cè)人體、動(dòng)物的血漿、血清、尿液樣品中肌酐含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。

 

二、產(chǎn)品組成:

名稱規(guī)格

50T

存儲(chǔ)

試劑(A):肌酐標(biāo)準(zhǔn)(10mmol/L)

1ml

4避光

試劑(B):肌酐標(biāo)準(zhǔn)稀釋液

10ml

RT

試劑(C):蛋白沉淀液

50ml

RT避光

試劑(D):Cr顯色液

5.5ml

RT

試劑(E): Cr Assay Buffer

5.5ml

RT

使用說(shuō)明書(shū)

一份

 肌酐(Cr)檢測(cè)試劑盒(去蛋白終點(diǎn)微板法)

三、自備材料:

1、1.5ml離心管、96孔板

2、離心機(jī)、酶標(biāo)儀

3、蒸餾水

 

四、操作步驟(僅供參考)

1、準(zhǔn)備樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備,-20℃凍存。取血清或血漿0.05ml,加入蛋白沉淀液0.45ml,充分混勻,靜置5min后3500r/min離心10min,取上清液,4℃保存待用;尿液中肌酐含量較高,應(yīng)先用蒸餾水作50~200倍稀釋后再測(cè)。

2、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰取肌酐標(biāo)準(zhǔn)(10mmol/L),按肌酐標(biāo)準(zhǔn)(10mmol/L)∶肌酐標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1:99的比例混合,使?jié)舛冗_(dá)到100μmol/L,即為標(biāo)準(zhǔn)品工作液-肌酐標(biāo)準(zhǔn)(100μmol/L);4保存,1周有效。

3、Cr加樣:按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的Cr濃度過(guò)高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

 

 

 肌酐(Cr)檢測(cè)試劑盒(去蛋白終點(diǎn)微板法)

加入物(μl)

空白

標(biāo)準(zhǔn)

測(cè)定

蒸餾水

150

肌酐標(biāo)準(zhǔn)(100μmol/L)

150

血清無(wú)蛋白濾液或稀釋尿液

150

Cr顯色液

50

50

50

Cr Assay Buffer

50

50

50

 

4、Cr檢測(cè)︰充分混勻,室溫放置15min,酶標(biāo)儀檢測(cè)510nm吸光度,空白孔調(diào)零,讀取各孔吸光度,分別為A標(biāo)準(zhǔn)、A測(cè)定。

 

計(jì)算:

 

血清(漿)肌西酐(μmol/L)=(A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn))×100

尿液肌西(μmol/d)=(A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn))×100×N×24h尿量(L)

式中

A測(cè)定=測(cè)定孔的吸光度

A標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)孔的吸光度

N=尿液稀釋倍數(shù)

內(nèi)生肌酐清除率值(L/24h)=尿液肌酐(μmol/L)/血清肌酐(μmol/L)×24h尿量(L)

校正的內(nèi)生肌酐清除率值(L/24h)=內(nèi)生肌酐清除率值×1.73/體表面積(m2)

注︰以正常人24h內(nèi)生肌酐清除率值為128L(即24h 內(nèi)有128L血液中的肌酐通過(guò)腎臟被清除)作為*,則內(nèi)生肌酐清除率(%)=校正的內(nèi)生肌酐清除率值×100/128(或0.78)

單位換算:d=24h

 

參考區(qū)間:

健康成年男性血清肌酐

44~133μmol/L(0.5~1.5mg/dl)

健康成年女性血清肌酐

70~106μmol/L(0.8~1.2mg/dl)

健康成年男性肌斷清除率值

10520ml/min

健康成年女性肌酐清除率值

9520ml/min

注意事項(xiàng):

1、測(cè)定各孔時(shí),各孔溫度均需達(dá)到室溫,否則影響結(jié)果。

2、輕度溶血樣本對(duì)肌酐測(cè)定無(wú)影響﹔尿液樣品中肌酐含量較高,樣品需做50~200倍稀釋,如果顯色后吸光度仍較高,還需將尿液繼續(xù)擴(kuò)大稀釋倍數(shù),重新檢測(cè)。

3、呈色后標(biāo)準(zhǔn)管吸光度較穩(wěn)定,但測(cè)定管吸光度隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加﹔另外肌酐濃度越高,吸光度變化越快,因此加入顯色劑后30min內(nèi)完成檢測(cè)為宜。

4、以標(biāo)準(zhǔn)品做梯度實(shí)驗(yàn),200μmol/L以下濃度呈不同程度的黃色-橙黃色,超過(guò)200μmol/L顏色逐漸加深,呈橘紅色,到1000μmol/L呈深橘紅色;用酶標(biāo)儀測(cè)定100μmol/L,吸光度值在0.3左右。

有效期:12個(gè)月有效。

附錄標(biāo)準(zhǔn)曲線制作:在室溫條件下按說(shuō)明書(shū)操作,用酶標(biāo)儀505nm對(duì)標(biāo)準(zhǔn)梯度進(jìn)行吸光度的測(cè)定,其數(shù)值及標(biāo)準(zhǔn)曲線如下(僅供參考)︰

Cr(μm)

0

20

50

100

150

200

400

700

1000

吸光度

0.059

0.107

0.183

0.303

0.438

0.544

1.033

1.731

2.454

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