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人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)方法

閱讀:218          發(fā)布時間:2018-7-2
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人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)方法
一、產(chǎn)品簡介
1. 產(chǎn)品名稱:人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞
2. 組織來源:脈絡(luò)膜組織
3. 產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25 細胞培養(yǎng)瓶
4. 細胞簡介:
人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)方法人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞分離自眼球脈絡(luò)膜組織;脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之
間,含有豐富血管和色素細胞,對外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差,當眼球受到從
前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時,堅硬的鞏膜在其外面又有抵
抗作用,使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色,
圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜,為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜
的后2/3 處的薄膜,由纖維組織、小血管和毛細血管組成,軟而薄,棕紅色,在
鞏膜和視網(wǎng)膜之間,續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層,其含
有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體,并有遮光
作用,使反射的物象清楚。同時對視覺系統(tǒng)起保護作用,對整個視覺神經(jīng)有調(diào)節(jié)
作用。續(xù)連于睫狀體后方,含豐富的血管和色素細胞,有營養(yǎng)和遮光作用。
本公司生產(chǎn)的脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法并通過
內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶;細胞經(jīng)
CD31/vWF 免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支
原體、細菌、酵母和真菌等。
5. 培養(yǎng)基信息:
M199、FBS、內(nèi)皮細胞生長添加劑、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、
Penicillin、Streptomycin 等
二、細胞培養(yǎng)狀態(tài)發(fā)貨時發(fā)送
細胞電子版照片
人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)方法三、使用方法
在技術(shù)部標準操作流程下,人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞可傳3-5 代;建議您收到細胞
后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25 細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽
和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出T25 細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS 清洗細胞一次;
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL 至培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個
培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀
察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml *培養(yǎng)基終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2-1:3 適當?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的完
全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每隔2-3 天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
四、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6 個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3 天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和
技術(shù)部溝通;由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我
們,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得
到解決。
5. 該細胞只可用于科研。
備注:由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考

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