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人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)方法
一、產(chǎn)品簡介
1. 產(chǎn)品名稱：人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞
2. 組織來源：脈絡(luò)膜組織
3. 產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4. 細(xì)胞簡介：
人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)方法人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之
間，含有豐富血管和色素細(xì)胞，對(duì)外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從
前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時(shí)，堅(jiān)硬的鞏膜在其外面又有抵
抗作用，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色，
圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜
的后2/3 處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細(xì)血管組成，軟而薄，棕紅色，在
鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層，其含
有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體，并有遮光
作用，使反射的物象清楚。同時(shí)對(duì)視覺系統(tǒng)起保護(hù)作用，對(duì)整個(gè)視覺神經(jīng)有調(diào)節(jié)
作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營養(yǎng)和遮光作用。
本公司生產(chǎn)的脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法并通過
內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)
CD31/vWF 免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支
原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5. 培養(yǎng)基信息：
M199、FBS、內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、
Penicillin、Streptomycin 等
二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)發(fā)貨時(shí)發(fā)送
細(xì)胞電子版照片
人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)方法三、使用方法
在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，人脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞可傳3-5 代；建議您收到細(xì)胞
后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽
和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS 清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL 至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)
培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀
察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml *培養(yǎng)基終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2-1:3 適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完
全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每隔2-3 天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6 個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3 天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和
技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我
們，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得
到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考