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微生物鑒定中常用的生化反應(yīng)

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實(shí)驗(yàn)試劑

淀粉培養(yǎng)基:蛋白胨培養(yǎng)基加0.2%的可溶性淀粉;
油脂培養(yǎng)基:蛋白胨培養(yǎng)基加花生油10mL、0.6%中性紅水溶液1mL;
明膠液化培養(yǎng)基:蛋白胨5g,明膠100~150g,水1000mL,pH7.2~7.4,115℃滅菌20min。
石蕊牛乳培養(yǎng)基:牛奶粉100g、石蕊0.075g、水1000 mL、pH6.8,121℃滅菌15 min。
實(shí)驗(yàn)材料

大腸桿菌(E. coli)、枯草桿菌(Bacillus subtilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)、黏乳產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes viscolactis)、銅綠假單胞菌(Psudomonas aeruginosa)、普通變形桿菌(Proteus vularis )
實(shí)驗(yàn)步驟

1. 淀粉水解試驗(yàn)
   1) 準(zhǔn)備淀粉培養(yǎng)基平板:將熔化后冷卻至50℃左右的淀粉培養(yǎng)基倒入無菌平皿中,待凝固后制成平板。
   2) 接種:用記號(hào)筆在平板底部劃成兩部分,在每部分分別寫上菌名,用接種環(huán)取少量的待測(cè)菌,點(diǎn)接在培養(yǎng)基表面的相對(duì)應(yīng)部分的中心,其中一個(gè)菌種應(yīng)是枯草桿菌做對(duì)照菌。
   3) 培養(yǎng):將接種后的平皿置于28℃恒溫箱培養(yǎng)24h。
   4) 檢測(cè):取出平板,打開平皿蓋,滴加少量的碘液于平板上,輕輕旋轉(zhuǎn),使碘液均勻鋪滿整個(gè)平板。菌落周圍如出現(xiàn)無色透明圈,則說明淀粉已經(jīng)被水解,表示該細(xì)菌具有分解淀粉的能力??梢杂猛该魅Υ笮≌f明測(cè)試菌株水解淀粉能力的強(qiáng)弱。
2. 油脂水解試驗(yàn)
   1) 將裝有油脂培養(yǎng)基的三角瓶置于沸水浴中熔化,取出并充分振蕩,使油脂均勻分布,再傾入無菌平皿中,待凝固成平板。
   2) 接種:于同一平皿的兩邊接種,其中一種是金黃色葡萄球菌作為對(duì)照菌。置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24h,取出后觀察平板菌苔顏色,如果出現(xiàn)紅色斑點(diǎn),即說明脂肪被水解了,此反應(yīng)為正反應(yīng)。紅色斑點(diǎn)大小說明測(cè)試菌株水解脂肪能力的強(qiáng)弱。
3. 明膠液化試驗(yàn)
   1) 接種:用穿刺接種法接種大腸桿菌或產(chǎn)氣腸桿菌于明膠培養(yǎng)基中。
   2) 培養(yǎng):放20℃恒溫箱中培養(yǎng)48h。若細(xì)菌在20℃下不長(zhǎng),則應(yīng)放在適溫度下培養(yǎng)。
   3) 觀察結(jié)果:觀察培養(yǎng)基有無液化情況及液化后的形狀。
因明膠在低于20℃時(shí)凝固,高于25℃時(shí)自行液化,若是在高于20℃下培養(yǎng)的細(xì)菌,觀察時(shí)應(yīng)放在冰浴中觀察,若明膠被細(xì)菌液化,即使在低溫下明膠也不會(huì)再凝固。
4. 石蕊牛乳試驗(yàn)
   1) 接種:將黏乳產(chǎn)堿桿菌和銅綠假單胞菌接種入石蕊牛乳培養(yǎng)基中。
   2) 培養(yǎng):將接種后的試管于37℃恒溫培養(yǎng)7d,另外保留一支不接種的石蕊牛乳培養(yǎng)基作為對(duì)照。
   3) 結(jié)果觀察:取出培養(yǎng)物,以不接種任何細(xì)菌的試管為對(duì)照,觀察接種不同細(xì)菌生長(zhǎng)后的變化情況。

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