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多肽制備

閱讀:282          發(fā)布時間:2018-8-28
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固相多肽合成就是不斷地在固相載體上加入α-氨基和側鏈基團被保護的氨基酸。FMOC基團是用來保護α-氨基中的N的,去除保護基團后,再加入第二個氨基酸。產(chǎn)生的多肽通過一個連接臂將C端連接在樹脂上,它可以被裂解下來。通常情況下,在多肽從樹脂上裂解下來的同時去除側鏈保護基團,一般采用哌啶去 FMOC保護基團,肽樹脂的裂解和側鏈保護基團去除一般用強酸,比如三,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)是樹脂去保護、氨基酸反應和洗滌的溶劑。

1. 合成步驟:

步驟 溶液或溶劑循環(huán)數(shù)時間
1 DMF2次30s
2含20%哌啶DMF溶液1次5min
3 DMF1次 30s
4含20%哌啶DMF溶液1次10min
5DMF6次 30s
6
Fmoc-AAF
HBTU
HPBt
NMM15
1次30-60min
7DMF2次30s

              HBTU: 2-(1H-Benzeotriazole-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorophosphate
  HOBt: N-Hydroxybnzotrizole•H2O
  NMM: N-methylmorpholine

 

2. 從樹脂上分離下來:
 
步驟 溶液或溶劑循環(huán)數(shù)時間
1 DMF2次30s
2含20%哌啶DMF溶液2次10min
3 DMF6次 30s
4DCM6次30s
5DCM6次 30s
6干燥1次10min
7試劑K1次2.5h
 

  試劑K:TFA/苯甲硫醚/EDT/苯酚/水=87.5/5/2.5/2.5/2.5(v/v)

3. 純化:

RP-HPLC純化

① HPLC條件:

流動相:A)0.1%TFA水溶液

B)0.1%TFA乙腈溶液

梯度:A/ B(90/ 40)到A/ B(40/ 90)30min

流速:1ml/min

溫度:室溫(23℃)

檢測:214nm的紫外

樣品:凍干的粗品

② 步驟:

a. 將粗品溶解在流動相中

b. 注入20-30mg(2-2.5ml)樣品

c. 將主峰收集到50ml管中

d. 凍干

4. 鑒定:

LC/MS條件:

流動相:A)0.05%TFA水溶液

B)0.1%TFA乙腈溶液

梯度:A/ B(90/ 10)到A/ B(40/ 60)15min

流速:1ml/min

溫度:室溫(23℃)

檢測:214nm的紫外

MS API:ESI

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