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線粒體電鏡照片觀察實(shí)驗(yàn)

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實(shí)驗(yàn)方法原理    線粒體同內(nèi)質(zhì)網(wǎng)一樣,除原核細(xì)胞和哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞外,其他所有細(xì)期線粒體(mitochodri)。一個(gè)細(xì)胞中線粒體的數(shù)目、形狀和大小常因細(xì)胞和生理狀況等不同而有較大的差別,如某種海藻中只有一個(gè)線粒體,玉米根品中有100~3000 個(gè),而海膽卵母細(xì)胞中線粒體多達(dá)30 萬(wàn)個(gè);在光學(xué)顯微鎮(zhèn)粒體呈線狀、顆粒狀、桿狀等,故稱線粒體; 大小一般直徑為0.5~1.Oom.0.2~ 2pm。電鏡下可見(jiàn)線粒體外包被雙層封閉的單位膜,內(nèi)含有主要由蛋白質(zhì)組成的質(zhì)(stroma,mati),內(nèi)、外膜并不相連,它們之間相間40~80A 。
實(shí)驗(yàn)材料    兔子
試劑、試劑盒    詹納斯綠B染液Ringer氏液
儀器、耗材    顯微鏡載玻片蓋玻片
實(shí)驗(yàn)步驟    
一、線粒體的光鏡切片觀察

1.  用詹納斯綠B染色的兔肝細(xì)胞光鏡切片,肝細(xì)胞中的線粒體呈藍(lán)綠色的顆粒。

二、線粒體的電鏡照片觀察

1.  不同細(xì)胞中線粒體的形態(tài)和數(shù)目不同。線粒體的外形多樣,如圓形、橢圓形、啞鈴形和桿狀。線粒體的數(shù)目與細(xì)胞類型和細(xì)胞的生理狀態(tài)有關(guān),線粒體多聚集在細(xì)胞生理功能旺盛的區(qū)域。

2.  線粒體脊的數(shù)目與分布方式是多種多樣的。一般與線粒體長(zhǎng)軸垂直排列,但也可見(jiàn)到與線粒體長(zhǎng)軸平行排列的脊。脊的橫切面呈囊狀或管狀。脊的數(shù)量與細(xì)胞呼吸機(jī)能的強(qiáng)度有很大關(guān)系。

3.  這有三張線粒體超薄切片的電鏡照片:

(1)張是小鼠腎小管上皮細(xì)胞中線粒體的電鏡照片,可見(jiàn)線粒體呈橢圓形和桿狀,由雙層膜包圍,內(nèi)膜向內(nèi)突起成平板狀脊,脊與線粒體長(zhǎng)軸垂直排列,腎小管上皮細(xì)胞重吸收作用需要能量,線粒體數(shù)目多。

(2)第二張是恒河猴脊髓突觸內(nèi)線粒體。可見(jiàn)線粒體體積小、數(shù)目多,脊與線粒體呈同心圓排列。

(3)第三張是小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞線粒體,線粒體的脊為分支的管,在照片上呈單層膜泡狀
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注意事項(xiàng)    
在使用透視電子顯微鏡觀察生物樣品前樣品必須被預(yù)先處理。隨不同研究要求的需要科學(xué)家使用不同的處理方法。

固定:為了盡量保存樣本的原樣使用戊二醛來(lái)硬化樣本和使用鋨酸來(lái)染色脂肪。

冷固定:將樣本放在液態(tài)的乙烷中速凍,這樣水不會(huì)結(jié)晶,而形成非晶體的冰。這樣保存的樣品損壞比較小,但圖像的對(duì)比度非常低。

脫干:使用乙醇和丙酮來(lái)取代水。

墊入:樣本被墊入后可以分割。

分割:將樣本使用金剛石刃切成薄片。

染色:重的原子如鉛或鈾比輕的原子散射電子的能力高,因此可被用來(lái)提高對(duì)比度。
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其他    
分辨能力是電子顯微鏡的重要指標(biāo),電子顯微鏡的分辨能力以它所能分辨的相鄰兩點(diǎn)的小間距來(lái)表示,即稱為該儀器的高點(diǎn)分辨率:d=δ。顯然,分辨率越高,即d的數(shù)值(為長(zhǎng)度單位)愈小,則儀器所能分清被觀察物體的細(xì)節(jié)也就愈多愈豐富,也就是說(shuō)這臺(tái)儀器的分辨能力或分辨本領(lǐng)越強(qiáng)。

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