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技術(shù)文章

小鼠淋巴瘤細(xì)胞;EL4培養(yǎng)操作流程

閱讀:313          發(fā)布時間:2024-10-5

    在完成了小鼠淋巴瘤細(xì)胞EL4的基本準(zhǔn)備與復(fù)蘇步驟后,接下來是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵階段。首先,將復(fù)蘇后的EL4細(xì)胞懸液輕輕吹打均勻,以避免細(xì)胞團塊的形成,這有助于細(xì)胞在培養(yǎng)環(huán)境中的均勻分布和生長。隨后,使用臺盼藍(lán)染色法檢測細(xì)胞活力,確保大部分細(xì)胞保持活性,為后續(xù)的實驗提供可靠的細(xì)胞基礎(chǔ)。

     接著,根據(jù)實驗需求調(diào)整細(xì)胞密度,通常將細(xì)胞懸液稀釋至適宜的濃度后,接種至預(yù)先準(zhǔn)備好的含有培養(yǎng)基(包括RPMI-1640培養(yǎng)基、10%胎牛血清、雙抗等)的培養(yǎng)瓶中。注意在接種過程中避免產(chǎn)生氣泡,氣泡可能會干擾細(xì)胞貼壁或造成培養(yǎng)基分布不均。

    培養(yǎng)瓶置于37℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),這是維持EL4細(xì)胞正常生長代謝的必要條件。每日需觀察細(xì)胞生長情況,包括形態(tài)、密度及培養(yǎng)基的顏色變化,以判斷是否需要更換新鮮培養(yǎng)基或進行傳代培養(yǎng)。一般而言,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時,應(yīng)進行傳代操作,以避免細(xì)胞因過度生長而衰老或死亡。

    在傳代時,首先輕輕吸去舊培養(yǎng)基,加入適量PBS緩沖液洗滌細(xì)胞表面,去除殘留的培養(yǎng)基和死細(xì)胞。然后,加入適量胰酶進行消化,待細(xì)胞邊緣變圓、輕輕搖晃即可脫落時,立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。通過輕柔吹打使細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液,并按需進行傳代接種或收集細(xì)胞進行后續(xù)實驗。

     通過精心細(xì)致的操作和持續(xù)的觀察,可以確保EL4細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中保持穩(wěn)定的生長狀態(tài),為后續(xù)的科學(xué)研究提供可靠的細(xì)胞模型。

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