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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人關(guān)節(jié)軟骨采用膠原酶聯(lián)合蛋白酶消化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人關(guān)節(jié)軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人關(guān)節(jié)軟骨原代細胞 | 組織來源 | 關(guān)節(jié)軟骨組織 |
英文名稱 | Human Articular Chondrocyte Cells | 貨號 | YS-01X7327 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人關(guān)節(jié)軟骨細胞分離自關(guān)節(jié)軟骨組織；關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結(jié)締組織的膠原纖維構(gòu)成的基本框架，這種框架呈半環(huán)形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質(zhì)上，上端朝向關(guān)節(jié)面，這種結(jié)構(gòu)使關(guān)節(jié)軟骨緊緊與骨結(jié)合起來而不會掉下來，同時當(dāng)受到壓力時候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著軟骨細胞，軟骨細胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細胞組成，這些軟骨細胞維持關(guān)節(jié)軟骨的正常代謝。關(guān)節(jié)軟骨沒有支配，也沒有血管，其營養(yǎng)成分必須從關(guān)節(jié)液中取得，而其代謝廢物也必須排至關(guān)節(jié)液中，關(guān)節(jié)軟骨的這種營養(yǎng)代謝必須通過關(guān)節(jié)運動，使關(guān)節(jié)軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關(guān)節(jié)運動對于維持關(guān)節(jié)軟骨的正常結(jié)構(gòu)起重要的作用。關(guān)節(jié)軟骨細胞位于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的關(guān)節(jié)軟骨細胞位于關(guān)節(jié)軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關(guān)節(jié)軟骨表面平行，越向深層的關(guān)節(jié)軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的關(guān)節(jié)軟骨細胞多2-8個成群分布于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)，這些關(guān)節(jié)軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，關(guān)節(jié)軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，關(guān)節(jié)軟骨細胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
原代軟骨細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml | Anti-Trk B 酪激酶B抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
AChE(Human Acetylcholinesterase) ELISA Kit 人乙酰酯酶 96T | Anti-Phospho-MK6 (Ser207)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化原活化蛋白激酶MKK6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TLR11 Toll樣受體11抗體 規(guī)格 0.2ml | PKB(Human protein kinase B) ELISA Kit 人蛋白激酶BMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
Phospho-HER3(Tyr1328)： 0酸化HER3受體抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh CCDC124 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體 規(guī)格 0.2ml |
phospho-FAK(Tyr577)： 0酸化粘著斑激酶抗體 0.1ml | CD30 ELISA Kit 大鼠CD30分子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
FCER2 Others Rat 大鼠 CD23 / FCER2 / FCER2A 人細胞裂解液 (陽性對照) | TNFRSF10A Others Human 人 TNFRSF10A / CD261 / APO2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人內(nèi)根鞘細胞HHIRSC | RHOA Others Human 人 RhoA 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞(傣族);KM9405 人大隱靜脈平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL | VCL Others Mouse 小鼠 VCL / Vinculin 人細胞裂解液 (陽性對照) |
LEFTY2 Others Human 人 Lefty A 人細胞裂解液 (陽性對照) | SK-CO-1(人結(jié)直腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 LoVo(人結(jié)腸癌細胞) |
豹貓皮膚成纖維樣細胞;LCS5 | 人關(guān)節(jié)軟骨原代細胞PKB(Human protein kinase B) ELISA Kit 人蛋白激酶BMulti-class antibodies規(guī)格： 48T |
Promocell C-28025 Endothelial Progenitor Medium, 內(nèi)皮祖細胞培養(yǎng)基(即用型) 100ml | 牛胚氣管細胞;EB (NBL-4) |
GBC-SD, 人膽囊癌細胞 Human | SK細胞，人白血病細胞 狗腎細胞隆突型,MDCK superdome細胞 少突膠質(zhì)前體細胞培養(yǎng)基OPCM-prf |
CD3D & CD3E Others Mouse 小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-Profilin 2/FITC 熒光素標(biāo)記前纖維蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
ORP150： 氧氣調(diào)節(jié)蛋白150抗體 0.2ml | 人胚肺二倍體細胞;HEL-2 人胎盤羊膜細胞培養(yǎng)基 100mL |
SPON2/： 細胞外基質(zhì)底物反應(yīng)蛋白2抗體 0.2ml | CENPB： 著絲粒蛋白B抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG 驢抗兔IgG 規(guī)格 1mg | FCER2 Others Rat 大鼠 CD23 / FCER2 / FCER2A 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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