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詳細(xì)介紹
人食管癌成纖維原代細(xì)胞
人食管癌成纖維細(xì)胞分離自食管癌組織；食管癌是常見(jiàn)的消化道腫瘤，每年約有30萬(wàn)人死于食管癌。其發(fā)病率和死亡率各國(guó)差異很大。我國(guó)是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，每年平均病死約15萬(wàn)人。男多于女，發(fā)病年齡多在40歲以上。食管癌典型的癥狀為進(jìn)行性咽下困難，先是難咽干的食物，繼而是半流質(zhì)食物，后水和唾液也不能咽下。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
英文名稱 | Human Esophageal Cancer Fibroblast Cells | 組織來(lái)源 | 食管癌 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8303 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人食管癌成纖維細(xì)胞
組織來(lái)源：食管癌
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人食管癌成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的人食管癌成纖維采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的人食管癌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21 | Anti-TSHR 促甲狀腺素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
OCT(Human ornithine carbamoyl transferase) ELISA Kit 人鳥(niǎo)酸基甲酰轉(zhuǎn)移酶 96T | Anti-Phospho-MYL2 (Ser19) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化肌球蛋白輕鏈2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TIMM17A 線粒體內(nèi)膜轉(zhuǎn)位酶抗體 規(guī)格 0.2ml | PAP(Human Prostatic Acid Phosphatase) ELISA Kit 人前列腺酸性0酸酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HIST1H2AH： 組蛋白H2A/S抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Cbx8 染色質(zhì)結(jié)合蛋白Cbx8抗體 規(guī)格 0.2ml |
FMDV Polyprotein (3A protein)： 口蹄疫病毒A型抗體 0.2ml | IL-8/CXCL8 ELISA Kit 大鼠白介素8Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
HA Others Influenza B 乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | DPP4 Others Human 人 DPPIV / DPP4 / CD26 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
人卵巢表層上皮細(xì)胞HOSEpiC | PVRL1 Others Rat 大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
TNFRSF1A Others Human 人 TNFRSF1A / TNFRI / CD120a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CSF2 Others Rat 大鼠 GM-CSF / CSF2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
MMP9 Others Human 人 MMP-9 / CLG4B 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | SF126(人腦瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 RD(惡性胚胎橫紋肌瘤) |
T-104BII型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)10mL | 人食管癌成纖維原代細(xì)胞PAP(Human Prostatic Acid Phosphatase) ELISA Kit 人前列腺酸性0酸酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
人骨骼肌星形細(xì)胞(HSkMSC)(5×105) CSC, 小鼠心肌細(xì)胞 Mouse | 人髂動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1 | A-431人表皮癌細(xì)胞 Human epidermoid carcinoma A-431 cells DMEM+10%FBS |
IL13 Others Mouse 小鼠 IL13 / ALRH 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Anti-Phospho-PSD95 (Tyr236/Tyr240) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化突觸后密度蛋白95抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
OLIG3： 少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子3抗體 0.2ml | Promocell C-25210 Hepatocyte Basal Medium , 肝細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 500ml |
SPECA： a-包襯蛋白抗體 0.2ml | CKMT： 酸性線粒體肌酸激酶抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/AP 堿性0酸酶(AP)標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格 0.1ml | HA Others Influenza B 乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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