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詳細介紹
人外周血樹突狀原代細胞(DC細胞)
人外周血DC細胞分離自外周血，由外周血單核細胞誘導而成的；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。DC細胞，全稱樹突狀細胞(DC)，是近年來倍受們關(guān)注的專職抗原呈遞細胞(APC)，能攝取、加工及呈遞抗原，啟動T細胞介導的免疫反應(yīng)。由美國學者Steinman于1973年在淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)，從脾臟中分離出一類與粒細胞、巨噬細胞和淋巴細胞形態(tài)和功都不同的白細胞，因其細胞膜向外伸出，形成與細胞軸突相似的膜性樹狀突起，故而命名為樹突狀細胞。未成熟DC具有較強的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細胞，處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。
英文名稱 | Human Peripheral Blood Maturation Dendritic Cells | 組織來源 | 外周血 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7542 |
細胞形態(tài) | 樹突狀 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：人外周血樹突狀細胞(DC細胞)
組織來源：外周血
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 半貼半懸浮
細胞形態(tài) 樹突狀
傳代特性 屬于高度分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實驗室分離的人外周血DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人外周血樹突狀細胞經(jīng)CD86免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-E1 舌鱗癌細胞，Tca-8113細胞 MADB106細胞，大鼠腺癌細胞系 | phospho-CDC16(Ser560)： 0酸化細胞分裂周期蛋白16抗體 0.1ml |
Anti-HOXB4 HOXB4抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ABCA5 三0酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A亞基5抗體 規(guī)格 0.2ml |
anti-cath-L/CL /FITC 熒光素標記組織蛋白酶L抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh ID4 DNA結(jié)合抑制因子4抗體 規(guī)格 0.1ml |
AQP1(Aquaporin1) 水通道蛋白-1抗原 0.5mg | HLA E： 人類白細胞抗原E抗體 0.2ml |
IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml | Rhesus antibody Rh FAM120C 構(gòu)成激活過氧化酶活化增生受體γ樣蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml |
人胚胎氣管組織來源細胞;CCC-HBE-2 | CM-H025人胰腺上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
HuTu-80細胞，人十二指腸腺癌細胞 人黑色素瘤細胞,HME2細胞 人肝永生化細胞;THLE-3 | H9c2(2-1) (大鼠心肌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
CL-0213SK-MES-1(人肺鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2 | A549(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
大鼠骨肉瘤細胞;UMR-106 | CF Protein Rat 重組大鼠 CF / Ciliary Neuroophic Factor 蛋白 |
NCI-H446細胞，小細胞肺癌 人血液白血病細胞,TF-1細胞 人肺巨細胞癌高轉(zhuǎn)移細胞株;PG-BE1 | 人外周血樹突狀原代細胞(DC細胞)Rhesus antibody Rh ID4 DNA結(jié)合抑制因子4抗體 規(guī)格 0.1ml |
雜交瘤(B類);Z1510A2G6A2C7 | AKT1 Others Human 人 AKT1 / PKB / PKBα 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
B95-8細胞，產(chǎn)EBV的絨猴白細胞 A549(人肺腺癌細胞) 非洲綠猴腎細胞;BS-C-1 | 小鼠角膜成纖維細胞培養(yǎng)基 100mL |
KM小鼠子瘤株;U27 | Rhesus antibody Rh sIgA/Gold 膠體金標記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格 0.5ml |
SP-D(Human Pulmonary surfatcant-associated protein D) ELISA Kit 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D 96T | Hs 578T(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
Beta-Amyloid (31-35) β淀粉樣肽31-35(多肽蛋白)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1mg | f- BetahCG(Human free chorionic gonadotropin) ELISA KIT 人游離β絨毛膜Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
MTM1： 肌微管素1抗體 0.2ml | 人胚胎氣管組織來源細胞;CCC-HBE-2 |
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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