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詳細(xì)介紹
兔氣管軟骨原代細(xì)胞
兔氣管軟骨細(xì)胞分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。軟骨由軟骨細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)組成。軟骨內(nèi)的基質(zhì)呈凝膠狀態(tài)，具有較大韌性。軟骨是以支持作用為主的結(jié)締組織。軟骨內(nèi)不含血管和淋巴管，營養(yǎng)物由軟骨膜內(nèi)的血管中滲透到細(xì)胞間質(zhì)中，再營養(yǎng)骨細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞間質(zhì)的不同可把軟骨分為3種，即透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨。透明軟骨的基質(zhì)是由膠原纖維、原纖維和周圍無定形的基質(zhì)組成。在胚胎時(shí)期有臨時(shí)支架作用，后來這種作用被骨代替。成人的透明軟骨主要分布在氣管和支氣管壁中、肋骨的胸骨端和骨的表面（關(guān)節(jié)軟骨）。
英文名稱 | Rabbit Tracheal Chondrocyte Cells | 組織來源 | 氣管 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8415 |
細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔氣管軟骨細(xì)胞
組織來源：氣管
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每3-4天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔氣管軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔氣管軟骨采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔氣管軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
小鼠肺腺癌細(xì)胞系;LA795 | 乳腺癌膜相關(guān)蛋白101抗體 |
氨基葡萄糖6-硫酸酯酶抗體 | 酸化上腺素能受體β2抗體 |
乙酰A羧化酶1ACCα抗體 | 纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子3抗體 |
血管緊張素Ⅱ受體2抗體 | 乳腺癌膜相關(guān)蛋白101抗體 |
纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子3抗體 | 酸化上腺素能受體β2抗體 |
人羊膜上皮細(xì)胞(HAEpic)( 5×105 ) | SV-HUC-1(人膀胱上皮永生化細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞HHSEC | SERPINA6 Others Human 人 SerpinA6 / CBG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
BMP2 Others Human 人 BMP-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CD3E Others Human 人 CD3e / CD3 epsilon 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
SW1116(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | TIMP1 Others Human 人 TIMP-1 / TIMP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM933 | 兔氣管軟骨原代細(xì)胞纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子3抗體 |
SIRPA Others Human 人 SIRPA / CD172A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 小鼠前胃癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);MFC-B5-GFP |
血小板衍生生長(zhǎng)因子 | THLE-3細(xì)胞，人肝上皮細(xì)胞 人癌細(xì)胞,MCF-7(OLD)細(xì)胞 大鼠心肌細(xì)胞RCM |
MET Others Human 人 c-MET / HGFR (aa 956-1390) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 半蛋白酶8相關(guān)蛋白2抗體 |
血管緊張素Ⅱ受體2抗體 | 人支氣管上皮樣細(xì)胞;BEAS-2B 人卵巢上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
氨基葡萄糖6-硫酸酯酶抗體 | 乙酰A羧化酶1ACCα抗體 |
半蛋白酶8相關(guān)蛋白2抗體 | 人羊膜上皮細(xì)胞(HAEpic)( 5×105 ) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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