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ELISA 實(shí)驗(yàn)基本原理與必要的試劑
閱讀：1313 發(fā)布時(shí)間：2021-11-3ELISA 即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，是一類常用的免疫酶技術(shù)。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，然后利用酶標(biāo)記（偶聯(lián)）的抗體或抗原與之孵育，加入顯色劑顯色，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定待測(cè)物顏色與標(biāo)準(zhǔn)物顏色的差異，繪制出酶活曲線得出待測(cè)物濃度。
ELISA的基本原理有三條：
（1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；
（2）抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
（3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
由于ELISA法一方面是建立在抗原與抗體免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上，因而，具有特異性。而另一方面又由于酶標(biāo)記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物，它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生放大作用，正因?yàn)榇朔N放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一種既敏感又特異的方法。
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。ELISA實(shí)驗(yàn)中有三種必要的試劑：
1、 固相的抗原或抗體（用于結(jié)合到固相載體上）；
2、標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）；
3、作用的底物（顯色劑，用于顯色）。