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小鼠胰島β細(xì)胞關(guān)于細(xì)胞移植的功效

重點(diǎn)在于其分泌的促增殖或抗凋亡的細(xì)胞因子,羊水干細(xì)胞能否分泌相關(guān)細(xì)胞因子有必要深入分析。

目的:觀察分離培養(yǎng)的羊水干細(xì)胞分泌細(xì)胞因子情況,及其對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖和凋亡的作用。

設(shè)計、時間及地點(diǎn):細(xì)胞學(xué)體外觀察,于2008-12/2009-06在南昌大學(xué)附屬醫(yī)院高血壓病研究所完成。材料:10例剖宮產(chǎn)孕婦足月羊水,50mL/例,用于分離培養(yǎng)羊水干細(xì)胞,同時留取其產(chǎn)后臍靜脈用于分離培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞,取前均獲孕婦知情同意。

方法:①貼壁法分離培養(yǎng)羊水干細(xì)胞,達(dá)80%融合時胰酶消化傳代,取傳至第3代細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度為5×108L-1,分為2組:缺氧羊水干細(xì)胞組通入體積分?jǐn)?shù)為2%O2+體積分?jǐn)?shù)為5%CO2+體積分?jǐn)?shù)為93%N2,常規(guī)羊水干細(xì)胞組通入體積分?jǐn)?shù)為5%CO2+體積分?jǐn)?shù)為95%空氣,兩組細(xì)胞37℃培養(yǎng)24h,收集各自培養(yǎng)上清液及細(xì)胞以備分析。

②取體外分離培養(yǎng)的第2代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,以2×104細(xì)胞/孔的密度接種于12孔板,分為3組:對照組加入含體積分?jǐn)?shù)為5%胎牛血清的EBM-2新鮮培養(yǎng)液2mL,常規(guī)羊水干細(xì)胞組加入含體積分?jǐn)?shù)為5%胎牛血清的EBM-2新鮮培養(yǎng)液1mL+羊水干細(xì)胞培養(yǎng)液1mL,缺氧羊水干細(xì)胞組加入含體積分?jǐn)?shù)為5%胎牛血清的EBM-2新鮮培養(yǎng)液1mL+缺氧誘導(dǎo)羊水干細(xì)胞培養(yǎng)液1mL,培養(yǎng)3d,加入10μg/L腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

主要觀察指標(biāo):流式細(xì)胞儀測定羊水干細(xì)胞表面抗原表達(dá),ELISA法測定羊水干細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、肝細(xì)胞生長因子情況,RT-PCR法測定細(xì)胞因子mRNA的表達(dá),檢測內(nèi)皮細(xì)胞增殖率及凋亡率。

結(jié)果:培養(yǎng)7d后羊水干細(xì)胞呈長梭形,以漩渦狀、輻射狀排列,第3代羊水干細(xì)胞呈CD29+,CD105+,CD34-。

常規(guī)培養(yǎng)的羊水干細(xì)胞可分泌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、肝細(xì)胞生長因子;缺氧誘導(dǎo)條件下血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子水平明顯增加(P0.01),其mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05),而肝細(xì)胞生長因子含量及mRNA的表達(dá)均無明顯變化(P0.05)。

與對照組比較,培養(yǎng)3d后常規(guī)羊水干細(xì)胞組、缺氧羊水干細(xì)胞組內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)均明顯增加(P0.05),腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)凋亡24h后內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率均明顯降低(P0.05),且缺氧羊水干細(xì)胞組變化幅度大于常規(guī)羊水干細(xì)胞組(P0.05)

。結(jié)論:羊水干細(xì)胞可分泌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、肝細(xì)胞生長因子,羊水干細(xì)胞培養(yǎng)液能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖,抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。經(jīng)缺氧處理后,羊水干細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的能力增加,對內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和凋亡干預(yù)作用增強(qiáng)。