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HPLC-MS 方法分析幾種蛋白的 胰蛋白酶酶解多肽產(chǎn)物的條件優(yōu)化

閱讀:2747      發(fā)布時間:2018-7-17
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在生物體內(nèi),蛋白的翻譯后修飾過程是蛋白發(fā)揮各種不 同生化功能的基礎(chǔ),這些翻譯后修飾包括糖基化、氧化、 甲基化和磷酸化等。作為生物藥物的蛋白在生產(chǎn)、運(yùn)輸、 保存過程中會產(chǎn)生變體,從而影響到藥物的活性和穩(wěn)定 性。因此蛋白的肽譜經(jīng)常被用來研究蛋白的翻譯后修飾 過程以及蛋白變體的存在。同時也用于生物制藥行業(yè)蛋 白產(chǎn)品初級結(jié)構(gòu)的確認(rèn) [1-3] ,從而更好地控制生化藥品的 質(zhì)量和確保病人的用藥安全。

本文采用胰蛋白酶酶解蛋白的方法,得到各種蛋白的肽 譜,比較幾款不同的反相色譜柱在分離蛋白酶解片斷時 的差異,同時借助質(zhì)譜,評價蛋白酶解產(chǎn)物 - 多肽在酸性 或者堿性流動相條件下表現(xiàn)出分離性能的差異。

儀器配置 Thermo Ultimate 3000 系統(tǒng):泵:DGP-3600RS;自動進(jìn)樣器: WPS-3000TRS;柱溫箱:TCC-3000RS;檢測器:DAD-3000RS 質(zhì)譜:TSQ Vantage 色譜軟件:Chromeleon 6.8

測試條件 與紫外檢測器兼容的液相色譜條件 色譜柱: 1- Acclaim 120 C18, 3mm×150mm, 3µm (P/N063691, S/N001119); 2-Acclaim 120 C8, 2.1mm×100mm, 3µm (P/N059123, S/N001337); 3-Hypersil GOLD C4, 2.1mm×150mm, 1.9µm (S/ N1008512×7, LOT10603); 流動相: 95% 超純水 +5% 乙腈 +0.1%TFA:5% 超純水 +95% 乙腈 +0.08%TFA, 梯度洗脫:

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