Ti-LAPP 模塊化照明系統(tǒng)

尼康Ti-LAPP系統(tǒng)提供全內(nèi)反射（TIRF）、光活化/轉(zhuǎn)化、光刺激與落射熒光的模塊化照明裝置。針對個性化的研究需要每一模塊都可靈活構(gòu)建專屬的顯微鏡系統(tǒng)。例如，多個TIRF模塊可整合到一個顯微鏡中用于不同實驗和高速、多角度TIRF成像。配合尼康TI的分層光學(xué)結(jié)構(gòu)，一臺顯微鏡可同時搭配多達五個照明模塊（如，兩組TIRF，F(xiàn)RAP、DMD和落射熒光裝置。）

| DMD模塊            

實現(xiàn)多點同時光活化

全新DMD模塊可實現(xiàn)任意形狀任意位置的光活化或光轉(zhuǎn)化，傳統(tǒng)的FRAP組件只能進行單點手動調(diào)節(jié)的光活化。使用NIS-Elements軟件對DMD照明的形狀、大小、位置和數(shù)目進行自由定制。研究者可利用這一技術(shù)標記細胞群中的一部分或者單個細胞中的部分蛋白或者跟蹤多細胞的遷移。DMD模塊是光遺傳學(xué)實驗的選擇，光遺傳技術(shù)可以借助光線改變部分細胞或蛋白功能。DMD模塊可以使用激光作為光源也可以使用更小光毒性的LED照明裝置。

小鼠胚胎纖維原細胞共轉(zhuǎn)mCherry標記的Lamin A（紅）與左下部光轉(zhuǎn)化的光敏GFP標記的Lamin A（綠），此轉(zhuǎn)化通過DMD模塊使用405nmLED光源進行。時間序列圖像使用熒光照明進行。通過光活化某一區(qū)域的Lamin蛋白，您可以觀察到局部區(qū)域的動態(tài)變化行為。

| H-TIRF模塊            

實現(xiàn)全自動TIRF調(diào)節(jié)與觀察

隨著觀察樣品與條件的不同，TIRF觀察的激光入射角度與焦點都有不同。調(diào)節(jié)入射角和焦點實現(xiàn)TIRF照明需要一定的技巧與經(jīng)驗。全新的H-TIRF模組通過檢測反射光速自動調(diào)節(jié)對焦與入射角。這些自動調(diào)節(jié)動作通過NIS-Elements軟件中的自動準直功能來完成。入射角度與漸逝區(qū)域的穿透深度可以分別保存并在不同實驗中任意調(diào)用以滿足拍攝的*性。

 H-TIRF模組配備有漸變自然光強濾片，此濾片移入光路中可使TIRF照明變得均勻*。

使用H-TIRF照明器與漸變ND濾片對離體制備的熒光標記微觀（TRITC與Alexa 647）與微觀結(jié)合蛋白進行三色成像。不同波長的入射角實現(xiàn)自動調(diào)節(jié)。

如不使用漸變ND濾片，則TIRF的照明會在視野中呈現(xiàn)中間亮四周暗的想象。使用漸變ND濾片則可獲得均勻*的照明。

離體制備的雙層膜結(jié)構(gòu)，使用Alexa 488(綠)同Alexa 561（紅）標記膜蛋白并使用H-TIRF照明器進行雙色成像（雙色TIRF）。蛋白聚集成簇并呈現(xiàn)點狀的結(jié)構(gòu)（上排）。

下排顯示488通道并以彩虹方式顯示可清晰分辯左右有圖像的差異。

 H-TIRF照明器用于不同波長入射焦的自動調(diào)節(jié)。

| FRAP模塊            

分析細胞內(nèi)蛋白動態(tài)變化

使用FRAP模塊，光漂白、光活化及光轉(zhuǎn)化等實驗可以與高幀率、高林敏度相機檢測相結(jié)合。這一模塊可對目標細胞的特定區(qū)域進行點刺激，在沒有點掃描共焦顯微鏡的情況下提供高性價比的細胞內(nèi)蛋白動態(tài)研究的方案。

小鼠胚胎成纖維細胞表達mCherry-lamin A，在右上角區(qū)域使用FRAP模塊進行點狀光漂白并研究lamin A分子的動態(tài)變化。時間序列圖像使用落射熒光照明。