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直接從離體組織中獲取細(xì)胞，往往更加接近于生物體內(nèi)的真實(shí)狀態(tài)。因而，這類細(xì)胞在藥物篩選、細(xì)胞移植、類器官培養(yǎng)以及腫瘤研究方面均得到了較為廣泛的應(yīng)用。然而，生物體組織一般需消化成單個(gè)細(xì)胞才可以進(jìn)行體外培養(yǎng)。在進(jìn)行細(xì)胞組織消化時(shí)，種類繁多的消化酶類往往使人眼花繚亂。選擇不合適的酶進(jìn)行組織消化，可能會(huì)引起消化不細(xì)胞死亡率高等問(wèn)題。如何選擇合適的酶進(jìn)行組織消化，困擾著不少科研工作者。為此，本文介紹了用于組織消化的常見(jiàn)酶類以及適用的組織，包含了正常組織以及腫瘤組織的消化方案。
1. 胰蛋白酶
胰蛋白酶（TrypLUS消化液）是一種利用微生物生產(chǎn)的動(dòng)物胰蛋白酶替代物，是一種無(wú)動(dòng)物來(lái)源的重組酶，可用于解離一系列的貼壁哺乳動(dòng)物細(xì)胞，穩(wěn)定性更高，純度更好，消化更溫和，細(xì)胞毒性更低。目前主要應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)中，可以在賴氨酸和精氨酸的C末端切割肽鍵，可以替代豬或牛胰蛋白酶（Trypsin）對(duì)貼壁細(xì)胞的消化解離。
2.胰蛋白酶
胰蛋白酶(Trypsin)其主要作用于賴氨酸或精氨酸結(jié)合的肽腱，除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細(xì)胞骨架，從而分離細(xì)胞。胰蛋白酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織，如胚胎、上皮、肝、腎等組織。但對(duì)于纖維組織和較硬的癌組織的效果較差，常常將胰蛋白酶與其他消化酶聯(lián)合使用。EDTA可以用來(lái)增強(qiáng)胰蛋白酶的水解功能，而血清則會(huì)影響胰蛋白酶的活性。
3.膠原酶
膠原酶(Collagenase)主要通過(guò)水解細(xì)胞間質(zhì)的脯氨酸，分離細(xì)胞。膠原酶對(duì)膠原的消化作用很強(qiáng)，僅對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有消化作用，對(duì)細(xì)胞的損害小，因此適用于消化分離纖維性組織和較硬的癌組織。鈣鎂離子和血清不會(huì)對(duì)膠原酶的活性及消化作用產(chǎn)生影響。膠原酶可細(xì)分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型膠原酶，不同類型膠原酶適用范圍不同，具體見(jiàn)表1。其中，膠原酶 Ⅰ 適用于大多數(shù)組織；膠原酶 II 消化能力稍強(qiáng)，通常用于骨、軟骨以及較硬/致密的腫瘤等致密組織；膠原酶 IV相比于膠原酶 Ⅰ 消化作用稍微溫和一些。
表 1. 膠原酶類型及適用范圍表
4. 透明質(zhì)酸酶
透明質(zhì)酸酶(Hyaluronidase)主要通過(guò)隨機(jī)降解透明質(zhì)酸的β-N-乙酰己糖胺-[1-4]糖苷鍵，從而降低透明質(zhì)酸的活性，常與膠原酶等聯(lián)合使用，用于結(jié)締組織的分離。
5. 脫氧核糖核酸酶Ⅰ
脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DeoxyribonucleaseⅠ, DNaseⅠ)可作用于細(xì)胞分離降解出的DNA，避免DNA引發(fā)的細(xì)胞凝集，對(duì)細(xì)胞完整性無(wú)破壞作用。通常配合膠原酶或透明質(zhì)酸酶等聯(lián)合使用，一般不會(huì)單獨(dú)使用。
6. 中性蛋白酶
中性蛋白酶(Dispase)具有溫和的蛋白酶水解活性，不會(huì)損壞細(xì)胞膜的完整性，常與膠原酶等聯(lián)合使用，其分離纖維樣組織的效率高于上皮組織。
7. 彈性蛋白酶
彈性蛋白酶(Elastase)通過(guò)作用于彈性蛋白的肽鍵、酰胺鍵和酯鍵將其水解，常與胰蛋白酶和膠原酶等聯(lián)合使用，用于分離結(jié)締組織和含有大量細(xì)胞網(wǎng)狀纖維的組織。
8. 組織消化參考方案
不同組織消化方案有所不同，同種組織的消化方案也不盡相同，考慮到組織的特殊性及酶的多樣性，針對(duì)具體組織仍需試驗(yàn)摸索以確定最佳消化方案。以下組織消化方案僅供參考。
表 2. 正常組織消化用酶列表
表 3. 腫瘤組織消化用酶列表
逐典TrypLUS消化液優(yōu)勢(shì)
1. DMF備案
2. 非動(dòng)物來(lái)源
3. 室溫貯存，無(wú)需胰酶抑制劑，稀釋即可終止
4. 消化溫和，消化后細(xì)胞活性高
5. 即開(kāi)即用，方便快捷
逐典TrypLUS消化液應(yīng)用案例
