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活體成像 | 生物發(fā)光和熒光發(fā)光的選擇和應用

2024-5-24  閱讀(309)

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目前小動物活體光學成像主要包括生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術,而選擇生物發(fā)光還是熒光發(fā)光,今天跟我們一起探討其中的不同吧。

一,發(fā)光原理

1,生物發(fā)光

用熒光素酶基因標記DNA,利用其產(chǎn)生的蛋白酶與底物發(fā)生反應,產(chǎn)生體內(nèi)自發(fā)光信號。

2,熒光發(fā)光

熒光染料、探針、蛋白受一定波長的激發(fā)光激發(fā)后,發(fā)射出波長大于激發(fā)光波長的熒光信號。




二,操作方法

生物發(fā)光

1、前期需將熒光素酶基因整合到細胞染色體DNA上以表達熒光素酶,包括構(gòu)建熒光素酶重組質(zhì)粒,細胞轉(zhuǎn)染,篩選陽性克隆細胞株。

2、每次成像前需要注射底物熒光素,實驗成本高。

熒光發(fā)光

1、前期可根據(jù)實驗需求選擇合適的熒光染料、熒光探針、熒光蛋白等,對不同的目標基因、蛋白、抗體、化合物等進行標記。

2、成像前無需注射底物,有合適的激發(fā)光源照射,就可發(fā)出特定波長的發(fā)射光,只要熒光基團穩(wěn)定,就可實現(xiàn)隨時激發(fā)、發(fā)光、檢測。

三,應用范圍

生物發(fā)光

企業(yè)文化,或稱組織文化,是一個組織由其價值觀、信念、儀式、符號、處事方式等組成的其有的文化形象,簡單而言,就是企業(yè)在日常運行中所表現(xiàn)出的各方各面。

熒光發(fā)光

光信號可能會隨著細胞的生長繁殖或?qū)嶒炛芷谘娱L逐漸減弱。但需保持熒光基團穩(wěn)定才可穩(wěn)定發(fā)光,在活體或離體組織器官進行觀察。

具有更多靈活的標記探針可選,應用范圍更廣,適合瞬時觀測實驗,如藥物、細胞在體內(nèi)的分布、靶向和代謝,疾病標記物的靶向監(jiān)測等。

生物發(fā)光不同于熒光發(fā)光,依靠酶促反應產(chǎn)生自發(fā)光信號,無需激發(fā)光,背景低,信噪比高(相差2-3個數(shù)量級),靈敏度高,且發(fā)光強度與檢測目標有良好的線性關系,可進行準確定量。前期涉及轉(zhuǎn)基因操作,實驗難度較高,實驗過程中需要消耗底物熒光素,實驗成本較高,應用范圍較小。

四,逐典D-螢光素鉀鹽優(yōu)勢

1.高純度(HPLC驗證純度≥99%)

2.優(yōu)異的生物發(fā)光性能

3.高溶解度(>40mg/ml)

五,應用場景

D-熒光素鉀鹽在不同領域具有多種應用場景。其中包括蛋白表達研究、抗腫瘤或抗病藥物研究以及mRNA疫苗開發(fā)等。

蛋白表達研究:將Luc基因插入需要研究的蛋白中,可用于定量目標蛋白在實驗動物體內(nèi)的表達情況。

抗腫瘤或抗病藥物:在腫瘤細胞或病毒中導入Luc基因,建立腫瘤或病毒感染小鼠模型,注射藥物后,通過活體成像技術觀測腫瘤大小或病毒感染的變化。

mRNA疫苗開發(fā):在mRNA中插入Luc基因,脂質(zhì)體包裹后注射實驗動物后,可通過活體成像技術可觀測疫苗的免疫效果。

六,應用案例分享








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