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吐溫、聚丙二醇 ：

吐溫20、吐溫80、聚丙二醇都屬于聚合物，其結(jié)構(gòu) 復(fù)雜，含有較多親水基團(tuán)，無強(qiáng)發(fā)色基團(tuán)，常規(guī)LCUV 無法進(jìn)行的定性分析。同時(shí)吐溫是不均勻混合 物，定量具有挑戰(zhàn)性。本文嘗試的蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 (ELSD)和QDa 質(zhì)譜檢測(cè)器為吐溫、聚丙二醇的定性定 量提供了一個(gè)理想的檢測(cè)手段。

 

色譜柱選擇策略：生物制劑中含有蛋白濃度較低(如蛋白含量10 mg/ mL)，推薦選用Oasis® MAX 色譜柱，Oasis MAX 柱是一款在線樣品前處理柱，樣品可過濾后直接進(jìn) 樣分析測(cè)定。生物制劑中含有高濃度的蛋白(如蛋白含量150 mg/ mL)，推薦選用XBridge C18 Direct Connect HP色譜 柱，樣品上樣之前需要對(duì)樣本做蛋白沉淀前處理，離 心后取上清液進(jìn)樣分析測(cè)定。

 

檢測(cè)器的選擇：(ELSD or QDa) 當(dāng)生物制劑中蛋白藥物濃度過高，需要使用蛋白沉 淀除去高濃度蛋白以避免干擾；這時(shí)樣品至少被稀 釋4倍，此時(shí)，ELSD 的靈敏度不能滿足需求，需 要使用靈敏度更高的單四極桿QDa檢測(cè)器進(jìn)行定量 分析。

 

流動(dòng)相 流動(dòng)相A：水-含有2%甲酸 流動(dòng)相B：異丙醇-含有2%甲酸 Wash溶液：50/50 水/異丙醇 Purge溶液：50/50 水/異丙醇 Seal wash溶液：90/10 水/乙腈

 

樣品前處理：蛋白藥物濃度較低時(shí)， 采用Oasis® MAX 柱，樣品 無需前處理，可以過濾后直接進(jìn)樣。蛋白濃度較高 時(shí)， 采用XBridge C18 Direct Connect HP 柱，需要 先把樣品做蛋白沉淀，取上清液進(jìn)樣。

 

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