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使用 Agilent凈化通過HPLC 測定防曬霜中的紫外線過 濾劑
閱讀：1000 發(fā)布時間：2020-3-30化學防曬霜配方中含有紫外線 (UV) 過濾化合物，可預防皮膚曬傷和 DNA 損傷。本 應用簡報開發(fā)并驗證了一種對樣品進行前處理，然后對防曬產(chǎn)品中的活性 UV 過濾 劑成分進行定量分析的可靠方法。在進行 HPLC 分析前，采用有機萃取，然后通過 膜過濾，從防曬乳液中提取活性成分。雖然參比標準分析物的保留時間重現(xiàn)性佳 (%RSD ≤ 0.11)，但在色譜柱上連續(xù)進樣防曬霜樣品時，觀察到嚴重的保留時間漂 移、基線漂移和峰形不規(guī)則。使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 色譜柱解決了色譜問 題，去除了提取樣品中的基質脂質。結果實現(xiàn)了可接受的定量準確度和回收率水平 (95%–103.5%)，提高了連續(xù)進樣 7 種非處方防曬產(chǎn)品中所有紫外線過濾劑保留時間 的一致性。
化學防曬產(chǎn)品中的活性成分是 FDA 批準 的芳香族化合物，在紫外線范圍內(nèi)具有較 高摩爾吸收率。這些紫外線過濾化合物與 保濕劑、乳化劑和增稠劑結合在一起，可 制得穩(wěn)定配方，其中的活性成分可用于保 護皮膚免受紫外線輻射。
需要進行定量分析測試，以確保非處方 (OTC) 防曬產(chǎn)品能提供廣譜保護且滿足美 國聯(lián)邦法規(guī)要求[1]。防曬霜配方復雜基質 和活性成分的紫外線吸收率使 HPLC 成為 當前方法，以確保產(chǎn)品一致性和質 量。但是，這些產(chǎn)品中存在的基質脂質會 導致色譜重現(xiàn)性較差，從而造成色譜柱污 染以及方法準確度和精密度不可靠。本應 用簡報討論了一種簡單的樣品前處理技 術，可在使用 Captiva EMR-Lipid 色譜柱 分析防曬產(chǎn)品時提高色譜重現(xiàn)性并延長色 譜柱壽命。
試劑與標準品 HPLC 級水、HPLC 級異丙醇 (IPA) 和 5 種 FDA 批準的紫外線過濾劑（通常用 于配制防曬霜[2]）的 USP 參比標樣購自 Sigma-Aldrich（表 1）。混合每種參比標 樣 10 mg，將其溶解在 IPA 中，使每種化 合物的終濃度達到 2 mg/mL，制得標 準混合儲備液。該儲備液作為高校準濃 度水平（5 級），還配制了四個連續(xù)稀釋的儲備液用作中間校準濃度，其中每種化 合物濃度為 1（4 級）、0.5（3 級）、0.25 （2 級）以及 0.125 mg/mL（1 級）。
消耗品 以下消耗品用于樣品前處理： • 15 mL 離心管（Celltreat 部件號 229412） • Agilent 6 mL Captiva EMR-Lipid 過濾柱 （部件號 5190-1004） • 10 mL NORM-JECT Luer Slip 進樣針 （Henke Sass Wolf 部件號 4100-000V0） • 安捷倫接頭：1、3、6 mL（部件號 12131001） • 安捷倫優(yōu)級 0.2 µm 玻璃纖維/尼龍針 頭過濾器（部件號 5190-5132）• 安捷倫 2 mL 棕色螺口蓋樣品瓶（部 件號 5182-0716） • 安捷倫螺口蓋 PTFE/紅色硅膠隔墊 （部件號 5190-7024）
從個人護理產(chǎn)品中提取和凈化紫外線過 濾劑 用分析天平將 100 mg 防曬霜或潤唇膏直 接稱入 15 mL 離心管中。開始提取時，將 2 mL 熱水（85 至 95 °C）加入試管中， 將樣品劇烈振搖并渦旋混合 2 分鐘。將 10 mL IPA 等分試樣加入試管中，再次渦 旋混合 2 分鐘，然后超聲處理 10 分鐘。 為促進進一步溶劑化和分散，將樣品以相 同方式再次進行渦旋混合和超聲處理。為促進液相和固相的分離，將樣品在 2500 rpm 下離心 15 分鐘。棄去沉淀塊并將一半左右的上清液小心轉移到 6 mL Agilent Captiva EMR-Lipid 過濾柱中。 將接頭塞蓋在過濾柱頂部，并用 10 mL Luer Slip 進樣針對樣品施加正壓。樣品混 合物以每滴 3–5 秒的流速低壓通過過濾 柱。將洗脫液收集到潔凈的 15 mL 錐形 離心管中。在前半部分流過后，將其余樣 品轉移到 EMR 過濾柱中。采用安捷倫優(yōu) 級 0.2 µm 玻璃纖維/尼龍針頭過濾器過濾 樣品去除顆粒，直接加入至 2 mL 棕色玻 璃樣品瓶中。
儀器配置：本分析使用由 Agilent ChemStation 軟件 （版本 C.01.09）控制并配備四元泵、 真空脫氣機、自動進樣器、色譜柱熱 交換器和二極管陣列檢測器 (DAD) 的 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)。使 用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 色譜柱 (3.0 mm × 50 mm, 2.7 µm) 和 InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 保護 柱 (2.1 mm × 5 mm, 2.7 µm) 進行色譜分 離。進樣量為 1 µL，進樣之間用 IPA 清 洗針頭 3 次。用于分析物分離的等度流 動相、流速和柱溫箱為安捷倫專有。DAD 在 238 nm 波長下用于數(shù)據(jù)采集。分析停 止時間為 11 分鐘。每次樣品分析后均運 行不進樣的空白，在該過程中，用 95% IPA 沖洗色譜柱，并在下一次進樣前用流 動相重新平衡。
結果與討論：標準品的系統(tǒng)適用性 該方法對參比混標實現(xiàn)了出色的基線分離 度，如圖 1 所示。在 0.78 分鐘處觀察到 的負峰是進樣的假陽性結果。如先前的報 道，在 1.92 分鐘處觀察到的峰是阿伏苯 宗標準品中的雜質[3]。在 4.92 至 9.87 分 鐘之間觀察到的六個主要峰是按洗脫順序 鑒定的標準品分析物：保留時間、峰寬（半峰高）、峰對稱性、 USP 拖尾因子和分離度值證實了參比混標 中六種成分出色的基線分離度（表 2）。 圖 2 為混標的六次重復進樣色譜圖。該方 法提供了出色的保留時間重現(xiàn)性，所有六 個參比標樣峰的 RSD% 介于 0.06–0.11， 峰面積 RSD < 0.41%。
