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技術(shù)文章

使用超高效液相色譜/三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜開發(fā)高通量生物分析方法

閱讀:542          發(fā)布時間:2022-12-6

摘要:生物分析領(lǐng)域的快速 LC/MS/MS液相色譜 方法開發(fā)受多個因素影響,是一項艱巨的任務(wù)。為了在加快分析速度的同時保持高靈敏度,目標分析物不應(yīng)該在受離子抑制影響的色譜保留范圍內(nèi)洗脫。質(zhì)譜儀的掃描速度必須足夠快,以獲得足夠多的數(shù)據(jù)點來明確表征由亞2µm 色譜柱分離得到的窄色譜峰。在典型的快速液相色譜條件下,產(chǎn)生的反壓會接近甚至高于目前高效液相色譜系統(tǒng)(壓力限 ≤ 400bar(5800psig))的反壓限值。在本應(yīng)用摘要中,我們采用 Agilent 1290 Infinity LC 系統(tǒng)與 Agilent 6460 三重串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀聯(lián)用,采用熱梯度聚焦 ESI(安捷倫噴射流技術(shù),AJS)和添加了阿pu唑侖的人血漿基質(zhì)(2nM 至 5000nM,相當于 0.06ng/mL 至 1544ng/mL)簡化高通量生物分析方法的開發(fā)。100µL 的加標血漿樣品采用三倍體積乙腈沉淀并離心。200µL 上清液用三倍體積 0.1% 甲酸(FA)水溶液稀釋。每個樣本重復(fù)進樣三次。采用通用離子源數(shù)據(jù)對 AJS 技術(shù)和傳統(tǒng)直角 ESI 技術(shù)進行了比較。Agilent 1290 Infinity LC 三重串聯(lián)四極桿 MS/MS 系統(tǒng),最高流速可達 2mL/min,最高壓力可達 1200bar,駐留時間低至 1-2ms,相應(yīng)地,分析時間不超過 0.5min,并且不會犧牲定量數(shù)據(jù)的質(zhì)量。安捷倫的超高壓快速高分離度色譜柱(RRHD)的柱效更高,可得到更窄的色譜峰,被分析物的色譜峰峰高顯著增加,與基質(zhì)組分分離,可提高被分析物的響應(yīng)(靈敏度)。


儀器條件Agilent 1290 Infinity LC MS/MS 系統(tǒng):Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng),包括帶集成脫氣機的二元泵,帶溫控系統(tǒng)的自動進樣器和柱溫箱。Agilent 6460A 三重串聯(lián)四極桿 LC/MS 帶 AJS 技術(shù)離子源或傳統(tǒng)的直角 ESI 源。

 

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