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賽爾瑞成(北京)生命科學(xué)技術(shù)有限公司

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賽爾瑞成新品:無血清低DMSO細(xì)胞凍存液上市啦!

2020-5-12  閱讀(2545)

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細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建于二十世紀(jì)初,歷經(jīng)一個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展,現(xiàn)在已成為生命科學(xué)領(lǐng)域越來越重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。由于細(xì)胞的特殊性,在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,或在細(xì)胞建株和建系過程中,隨著傳代次數(shù)的增加,細(xì)胞的各種生物特性都會逐漸發(fā)生變化。因此,原始細(xì)胞種子的及時(shí)保存就顯得尤為必要。在雜交瘤單抗的制備過程中,雜交瘤細(xì)胞以及克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存,是*的操作。因?yàn)樵跊]有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,在細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等緣故而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,如果沒有原始細(xì)胞的凍存,則將因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄。除此之外,購買、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞也需要利用細(xì)胞凍存的形式來進(jìn)行。因此,及時(shí)方便地進(jìn)行細(xì)胞的凍存在實(shí)際工作中顯得十分必要。

 

細(xì)胞凍存要取得好的效果,多采用血清、甘油或二甲基亞砜(DMSO)等作為保護(hù)劑,大限度的保存細(xì)胞活力。這些物質(zhì)有些能提高細(xì)胞膜對水的通透性,在緩慢冷凍過程中可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。同時(shí),有些保護(hù)劑在細(xì)胞外也能減輕溶液中高濃度溶質(zhì)對細(xì)胞的損傷,進(jìn)一步避免細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇過程中受到損傷。滲透性保護(hù)劑DMSO和非滲透性保護(hù)劑血清(主要含白蛋白)是使用較為廣泛,效果較為穩(wěn)定可靠的。

 

此外,采用“慢凍快融”的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/分鐘,當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。復(fù)蘇細(xì)胞采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。

 

現(xiàn)有凍存方法存在的問題:
1、DMSO對細(xì)胞存在一定的毒性,用量受到限制,降低或者不使用DMSO,尋找其它替代物是比較好的選擇。但是目前,該技術(shù)領(lǐng)域還未發(fā)現(xiàn)凍存保護(hù)效果能與DMSO媲美的物質(zhì),因此,聯(lián)合其它成分,形成新的配方,降低DMSO的含量就成了較為現(xiàn)實(shí)的選擇。
2、血清,即使是純化得到的白蛋白,由于其動(dòng)物來源的特性,會極大增加帶來病毒等感染物質(zhì)的可能。而且,血清來源受限,價(jià)格昂貴,所以其使用也必然會受到越來越多的限制。因此,尋找替代血清的非滲透性保護(hù)劑也顯得尤為必要。
3、目前,較成熟和穩(wěn)定的凍存細(xì)胞技術(shù)是將加有保護(hù)劑的細(xì)胞懸液置于-196℃液氮中,這樣可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而保持細(xì)胞的特性,在需要的時(shí)候經(jīng)過復(fù)蘇程序,使得細(xì)胞重新生長增殖以用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞儲存在-196℃液氮中,理論上儲存時(shí)間是無限的,但是液氮凍存步驟繁瑣,需要經(jīng)過程序降溫,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)(或隔夜),后才移至液氮罐中進(jìn)行長期的儲存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個(gè)小時(shí),以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量的死亡。)

 

賽爾瑞成科學(xué)家團(tuán)隊(duì)在細(xì)胞凍存領(lǐng)域進(jìn)行了大量研究工作,早在 2015年即自主研發(fā)了“無血清細(xì)胞凍存液”(貨號:CF0101) 。產(chǎn)品獲得了廣大科研工作者的喜愛。

 

賽爾瑞成新發(fā)明了一種新的凍存液體系: 無血清低DMSO細(xì)胞凍存液(貨號:CF0201;專利申請?zhí)枺?02010307890.6) ,不僅可以省卻對血清的使用,而且還顯著降低了DMSO的用量。同時(shí),本專利細(xì)胞凍存液凍存的細(xì)胞懸液可以直接放置于-80℃冰箱,既不需要繁瑣的程序降溫或采用程序降溫儀,更不需要放置在-196℃液氮中,節(jié)省了大量時(shí)間和精力。該細(xì)胞凍存液通用于人和各種動(dòng)物細(xì)胞株。特別配方(主要成分為5% DMSO和氨基酸)具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力。不含血清及動(dòng)物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細(xì)胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存,也適用于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存。

 

產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 高安全性,不含血清及動(dòng)物源成分,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。
2. 低DMSO,DMSO的含量為5%(v/v),極大降低了對細(xì)胞潛在的毒性作用。
3. 細(xì)胞存活率高,無批次差異。
4. *凍存液配方,可直接使用,方便簡捷。
5. 可直接存放于-80℃冰箱凍存,無需經(jīng)過費(fèi)時(shí)的程序降溫過程(省時(shí)、省力、省錢),不需要采用程序降溫儀,更不需要放置在-196℃液氮。
6. 可原位凍存,比如雜交瘤細(xì)胞的亞克隆,可以大規(guī)模減少工作量,避免污染。

 

凍存效果對比:

 

圖1. 小鼠成纖維細(xì)胞3T3細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)對比圖

對照B:存活率89%                                      本產(chǎn)品:存活率97%

 

圖2. 人胚腎細(xì)胞293E細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)對比圖

對照B:存活率86%                                   本產(chǎn)品:存活率93%

 

                 注:對照A: DMEM培養(yǎng)基+10%血清+10%DMSO,液氮凍存;
                        對照B: Cellregen無血清細(xì)胞凍存液(DMSO 10% v/v);
                        本  品:無血清低DMSO細(xì)胞凍存液(DMSO 5% v/v)。

 

附: 通用細(xì)胞凍存液,Cellregen無血清細(xì)胞凍存液、無血清低DMSO細(xì)胞凍存液的比較

 

 

通用細(xì)胞凍存液

Cellregen 無血清細(xì)胞凍存液

無血清低 DMSO 細(xì)胞凍存液

主要成份

含血清、含 DMSO

不含血清,含 DMSO 10%

不含血清,低 DMSO 5%

細(xì)胞毒性

安全性

動(dòng)物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)偏高

無動(dòng)物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)

無動(dòng)物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)

凍存細(xì)胞種類

適合含血清細(xì)胞凍存

通用型

適合各類細(xì)胞凍存

通用型

適合各類細(xì)胞凍存

無血清培養(yǎng)細(xì)胞生長狀態(tài)

易改變易由懸浮狀態(tài)回復(fù)貼壁狀態(tài)

保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài)

保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài)

批次差異

批次差異大

無批次差異

無批次差異

操作方法

步驟繁瑣

需程序降溫凍存

簡單快捷

一步凍存 -80 ℃冰箱

簡單快捷

一步凍存 -80 ℃冰箱

保存設(shè)備

要求高(液氮)

要求低( -80℃ 冰箱)

要求低( -80℃ 冰箱)

微量凍存

細(xì)胞易死亡,存活率偏低

細(xì)胞存活率高

細(xì)胞存活率高

原位凍存

不可行

可行,且方便快捷

: 雜交瘤細(xì)胞孔板凍存

可行,且方便快捷

: 雜交瘤細(xì)胞孔板凍存

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