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霉菌培養(yǎng)箱菌落傳代操作規(guī)范

閱讀:1271        發(fā)布時間:2022-5-25
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  霉菌培養(yǎng)箱是適合培養(yǎng)霉菌等真核微生物的試驗設備,因為大部分霉菌適合在室溫(25攝氏度)下生長,且在固體基質(zhì)上培養(yǎng)時需要保持一定的濕度,所以一般的霉菌培養(yǎng)箱由制冷系統(tǒng),制熱系統(tǒng),空氣加濕器和培養(yǎng)室,控制電路和操作面板等 部分組成,并使用溫度傳感器和濕度傳感器來維持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度和濕度的穩(wěn)定。有些特殊的霉菌培養(yǎng)箱還可以設定溫度濕度隨培養(yǎng)時間變化。
 
  為了提高對實驗用菌種的使用、管理,通過對菌種的傳代、保存,從而確保其在實驗中的有效性和準確性。
 
  范圍:無菌檢驗、微生物限度檢查檢驗用菌株。
 
  傳代前將購進菌種及滅菌后的營養(yǎng)瓊脂小斜面置于室溫放置30分鐘,待溫度平衡后再移入陽性操作室內(nèi)。
 
  換好衣服,做好防護。
 
  二、三代工作菌種的制備:
 
  從超低溫冰箱中取出所需的菌種冷凍管,置于35~40℃的水浴中進行解凍1分鐘。解凍后,放入生物安全柜內(nèi),用冷卻后的滅菌接種環(huán)從冷凍管中取一環(huán)菌液接種于10ml 滅菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,置于30~35℃的培養(yǎng)箱內(nèi)18~24小時,進行增菌培養(yǎng)。(第二代)培養(yǎng)后,用冷卻的滅菌接種環(huán)從增菌液中沾取一環(huán)接種于相應的培養(yǎng)基斜面上貼上菌種標簽,置于30~35℃的 霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)18~24小時,進行培養(yǎng)。確認符合后置于5℃的冰箱內(nèi)保存。使用時將培養(yǎng)出的斜面用、5ml的滅菌生理鹽水將斜面上的菌落洗下制成菌懸液使用。(第三代)在第三代菌種有效期內(nèi)進行第四代的接種傳代。
 
  第四、五代工作菌種的制備:
 
  從5℃的冰箱內(nèi)取出第三代工作菌種,用冷卻的滅菌接種環(huán)挑取1個菌落接種于相應的瓊脂斜面培養(yǎng)基中,置于30~35℃的 霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18~24小時后,確認符合后置于5℃的冰箱內(nèi)作為第四代工作菌種保存,備用。
 
  接種操作規(guī)范
 
  點燃酒精燈,左手握住菌種斜面,將管口靠近火焰旁,右手拿接種棒后端,將接種環(huán)燒紅30秒鐘,隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼,往返通過3次。右手用無名指、小指及掌部夾住硅膠塞,左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼,右手再輕輕撥開硅膠塞,將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下,稍冷卻再移至菌苔上,刮取少量菌苔,隨即取出接種棒,并將菌種管口移至火焰旁。塞上硅膠塞,左手將菌種管放下,取營養(yǎng)瓊脂小斜面一支,右手用無名指、小指及掌部夾住硅膠塞,左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼,右手再輕輕撥開硅膠塞,將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的底部,由低向上,將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折移動,使菌劃在斜面的表面上。
 
  取出接種環(huán),在火焰旁將培養(yǎng)基管硅膠塞堵上,然后將接種過菌的接種棒在火焰上燒灼滅菌。
 
  將已接種好的細菌管置30℃一35℃細菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時,霉菌管置23℃  -  28℃ 霉菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)5-7日。取出后放入冰箱保存并上鎖。
 
  菌種的傳代次數(shù)不得超過5代,每一菌株每次傳代不超過15支; 1支作為下次傳代用,其余作為檢驗用,每月傳代一次。
 

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