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NIBSC05/162人血漿中α1-抗胰蛋白酶國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作用

時(shí)間:2024/5/10閱讀:440
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名稱α1-抗胰蛋白酶,血漿來源/人血漿中α1-抗胰蛋白酶國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)AAT
貨號05/162    WHO標(biāo)準(zhǔn)品     WHO05/162
類別生物治療止血生物治療
關(guān)鍵字AAT、Alpha-1、Alpha-1-蛋白酶抑制劑
級別國際標(biāo)準(zhǔn)
證書類型從血漿中純化的AAT標(biāo)準(zhǔn),用于測定血漿或重組來源的AAT產(chǎn)物的效力。以摩爾和毫克為單位進(jìn)行校準(zhǔn)。







來源:α-1-抗胰蛋白酶(AAT)屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑家族,彈性蛋白酶是主要的生理靶標(biāo)。血漿衍生的治療性AAT產(chǎn)品用于治療AAT缺乏癥(Alpha-1),這是一種在幾乎所有人群中都發(fā)現(xiàn)的遺傳疾病,可導(dǎo)致成人和兒童的肝臟和肺部疾病。AAT的第一個(gè)國際標(biāo)準(zhǔn)由從血漿中純化的AAT制成,由治療濃縮物制造商提供,主要用于標(biāo)準(zhǔn)化用于替代治療的AAT效力的測定,包括血漿衍生的、重組的和轉(zhuǎn)基因的產(chǎn)品。該標(biāo)準(zhǔn)也適用于分配AAT制劑的總蛋白和抗原濃度。對于抗原測定,各個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)調(diào)查用于待測材料的抗體的適用性。當(dāng)測試重組產(chǎn)物時(shí),糖基化模式的差異可能會影響結(jié)果,這一點(diǎn)尤為重要。這些研究報(bào)告可作為BS工作文件世界衛(wèi)生組織/BS/06.2044和世界衛(wèi)生組織/BS/08.2092查閱。

作用:作為合作研究的一部分,測定了AAT的第一個(gè)國際標(biāo)準(zhǔn)的效力,其中AAT的抑制活性通過對胰蛋白酶的滴定來測定。活性胰蛋白酶的摩爾濃度用4-硝基苯基-4-胍苯甲酸鹽酸鹽(NPGB)通過活性位點(diǎn)滴定法測定。AAT和胰蛋白酶形成緊密的1:1化學(xué)計(jì)量配合物,因此相對于已知濃度的胰蛋白酶滴定AAT允許以摩爾單位表達(dá)活性AAT濃度。本國際標(biāo)準(zhǔn)中活性AAT的濃度為每安瓿243毫摩爾。還使用包括氨基酸分析在內(nèi)的多種方法測定了標(biāo)準(zhǔn)品的總蛋白和抗原濃度,并發(fā)現(xiàn)其與活性濃度一致。這相當(dāng)于每安瓿12.4mg AAT,應(yīng)用分子量為51000g/mol,通過質(zhì)譜法測定該制劑。具有不同分子量的重組制劑將需要不同的轉(zhuǎn)換因子,以根據(jù)包括本標(biāo)準(zhǔn)在內(nèi)的滴定測定中測定的重組制劑的活性抑制劑摩爾數(shù)計(jì)算mg量。傳統(tǒng)上,國際標(biāo)準(zhǔn)是基于一致值分配的單位,代表特定被測量的主要標(biāo)準(zhǔn),因此不分配不確定性。安瓿含量的不確定度05/162可被視為填充物的變異系數(shù)0.15%。

重構(gòu)后,除了活性AAT外,每個(gè)安瓿還將含有磷酸鹽緩沖液和生理鹽水(17mM磷酸鹽;38mM氯化物,81mM鈉,pH 7.0)和144mM甘露醇作為填充劑加入。沒有添加其他蛋白質(zhì)。制備了9792支05/162安瓿,平均填充重量為1.0057克(cv=0.15%),平均干重為0.0468克(cv=3.74%),殘余水分為0.6615%(cv=11.31%)。5.儲存未打開的安瓿應(yīng)在-20oC或以下的黑暗中儲存。請注意:由于凍干材料的固有穩(wěn)定性,NIBSC可能會在環(huán)境溫度下運(yùn)輸這些材料。

注意事項(xiàng):此制劑不適用于人類或人類食物鏈中的動物。該制劑含有人類來源的材料,其最終產(chǎn)物或來源材料已經(jīng)檢測,HBsAg、抗-HIV和HCV RNA呈陰性。與所有生物來源的材料一樣,這種制劑應(yīng)被視為對健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實(shí)驗(yàn)室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應(yīng)包括佩戴防護(hù)手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時(shí)應(yīng)小心,避免割傷。

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