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上?;菡\生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第7年

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瓊脂糖預(yù)染預(yù)制膠電泳試劑盒使用中可能出現(xiàn)的問題上?;菡\生物專業(yè)解答

時(shí)間:2022/5/30閱讀:382
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瓊脂糖預(yù)染預(yù)制膠電泳試劑盒使用過程中可能出現(xiàn)一些問題,比如:如何選擇預(yù)制膠濃度,選擇什么體系,Marker條帶電泳清晰但樣品電泳很差,回收低,掛孔和圖像不好等原因,惠誠生物針對推出的該款預(yù)制膠進(jìn)行解答。

 

1、如何選擇預(yù)制膠濃度?

不同分子量對應(yīng)的預(yù)制膠濃度,實(shí)驗(yàn)情況很復(fù)雜,下表僅供參考:

圖片

2、能不能使用其他體系?

目前這款預(yù)制膠使用體系為TAE,不能在其他體系(如TBE/TPE)的電泳液中電泳;

 

3、Marker條帶電泳清晰,樣品電泳很差?

一般情況是樣本的問題,因?yàn)槟z只是一個(gè)平臺(tái),不改變核酸的結(jié)構(gòu)和形態(tài),具體解決方案如下:

A、調(diào)整電壓(一般降低);B、減少上樣量或者稀釋;C、用新的制備樣品;D、調(diào)整PCR 的條件(如退火溫度)等等。

 

4、為什么回收低?

若回收低,需要調(diào)高熔膠溫度和延長熔膠時(shí)間,具體原因如下:

A、膠是0.7cm 厚的標(biāo)準(zhǔn)膠,比用戶自配的膠在切膠的位置厚很多,因此在切膠的過程中切的膠要比自配的膠多;

B、膠孔比用戶原來自己的孔寬一點(diǎn)點(diǎn),用戶在切膠的過程中也會(huì)比自配的膠切的多。

這樣的話,用戶使用他們原來的習(xí)慣,在相同的時(shí)間膠沒有*熔掉,回收量就會(huì)少很多。

 

5、出現(xiàn)掛孔的原因?

用戶在電泳液外面點(diǎn)樣,樣品因?yàn)闆]有電泳液保護(hù),會(huì)很快擴(kuò)散到膠里,有可能形成掛孔。

 

6、圖形不好怎么辦?

預(yù)制膠因?yàn)樵诘蜏貢r(shí)間長,電泳時(shí)較好比客戶經(jīng)常使用的電壓低一些,調(diào)低20-40伏特左右,會(huì)得到比較好的圖形。

 

7、電泳是一個(gè)系統(tǒng),任何原料都可能引起變化,任何改變也需要調(diào)整。根據(jù)實(shí)際需求,選擇*優(yōu)方案。

 

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