β-半乳糖苷酶 β-galactosidase存在于多種細菌、真核生物細胞和一些病原體中，參與乳糖代謝與細胞衰老過程。β-半乳糖苷酶在哺乳動物體內(nèi)其主要存在于腸道菌群中，但在老化細胞也有一定活性。β-半乳糖苷酶廣泛存在于生物體，在演化與生存過程中發(fā)揮重要作用。

Blue-Gal是一種β-半乳糖苷酶重要的顯色底物，可產(chǎn)生比 X-gal更深的藍色。β-半乳糖苷酶水解 blue-gal 產(chǎn)生不溶于乙醇和二甲苯的藍色沉淀物，適于免疫印跡和免疫細胞化學(xué)分析。Blue-Gal是一種廣泛應(yīng)用于組織化學(xué)、細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)與酶學(xué)研究的重要化學(xué)試劑。它通過檢測β-半乳糖苷酶的活性與表達，為腫瘤研究、干細胞分化、基因表達調(diào)控與細胞活性評價提供有效工具。

規(guī)格參數(shù)：

HGS-01045 5-溴-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 Blue-Gal Bluo-Gal 97753-82-7

Blue-Gal檢測β-半乳糖苷酶技術(shù)原理：

Blue-Gal在β-半乳糖苷酶的作用下可被水解生成半乳糖和5-溴-4-氯-3-吡啶-2-醛，后者與氫氧化鐵反應(yīng)生成藍色產(chǎn)物。

Blue-Gal檢測β-半乳糖苷酶活性步驟:

1. 向樣品中加入Blue-Gal底物，如果樣品中存在β-半乳糖苷酶，Blue-Gal將被水解；否則Blue-Gal保持不變。

2. 反應(yīng)一定時間后，加入氫氧化鐵(Fehling試劑)，如果Blue-Gal被水解，會與氫氧化鐵反應(yīng)生成藍色產(chǎn)物；否則無色。

3. 通過顯微鏡下的藍色沉淀或藍色溶液判斷β-半乳糖苷酶的存在與否。或者測量藍色產(chǎn)物的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算酶活性或濃度。

4. 根據(jù)反應(yīng)條件如時間、溫度、pH等控制變量，可以檢測β-半乳糖苷酶活性的變化或酶反應(yīng)動力學(xué)，以評價不同因素對其活性的影響。

5. 也可以在固定反應(yīng)條件下，比較不同樣品中藍色產(chǎn)物的生成，以判斷β-半乳糖苷酶活性或表達的高低。這用于轉(zhuǎn)基因檢測、細胞活性比較等。

Blue-Gal檢測β-半乳糖苷酶主要應(yīng)用:

1. 組織化學(xué)染色

Blue-Gal用于檢測組織內(nèi)β-半乳糖苷酶活性或β-gal過表達，實現(xiàn)組織化學(xué)染色。常用于檢測腫瘤組織在癌變過程中l(wèi)acZ基因表達變化。

2. 干細胞和分子生物學(xué)研究

Blue-Gal用于檢測干細胞向特定類型細胞的分化過程中l(wèi)acZ基因的表達，以監(jiān)測干細胞向目標(biāo)細胞的定向分化。也用于研究lacZ基因在胚胎發(fā)育與分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的表達調(diào)控。

3. 轉(zhuǎn)基因檢測

Blue-Gal用于檢測不同組織及細胞中轉(zhuǎn)入的lacZ報告基因表達,實現(xiàn)對組織特異性啟動子活性與組織向性的檢測評價。

4. 細胞活性與毒性檢測

Blue-Gal用于檢測不同條件下細胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性的變化，間接反映細胞代謝活性的增強或抑制，用于細胞活性與毒性檢測。如某些試劑對β-半乳糖苷酶活性的影響可判斷其對細胞活性的作用。

5. 酶學(xué)研究

Blue-Gal作為β-半乳糖苷酶的重要底物，用于研究β-半乳糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)、基因調(diào)控作用機制以及激活與抑制因素，為酶學(xué)基礎(chǔ)研究提供工具。