HTRF(均質(zhì)時間分辨熒光)是一種免洗技術(shù)，用來檢測純液相體系中待測物，是一款高通量藥物篩選利器。。它將標(biāo)準(zhǔn)熒光共振能量轉(zhuǎn)移FRET技術(shù)與時間分辨熒光TRF測量相結(jié)合，消除了短暫的背景熒光。對于夾心試驗(yàn)，使用兩種識別感興趣蛋白質(zhì)的抗體，其中一種抗體與供體結(jié)合，另一種與受體結(jié)合。如果2個抗體識別分析物，供體激發(fā)時會發(fā)出熒光，能量會轉(zhuǎn)移到附近的受體，從而產(chǎn)生特定的受體熒光。供體熒光也被測量，并與受體熒光的比率被應(yīng)用。

HTRF技術(shù)測定如何工作？

HTRF只需要幾個步驟:

1. 將分析物或樣品添加到微孔板中；

2. 添加檢測試劑：抗分析物偶聯(lián)供體和受體偶聯(lián)抗體；

3. 孵育2小時(某些化驗(yàn)可達(dá)一夜)；

4. 在HTRF兼容或認(rèn)證的微孔板閱讀器上讀取該分析。由受體發(fā)出的光將與相互作用的水平成比例。
   

HTRF技術(shù)優(yōu)勢:

1.操作簡單：空板直接加樣;加完即可檢測;時間短加樣和孵育2h；

2.適合珍貴樣本：整個實(shí)驗(yàn)體系只需20ul；

3.均相檢測：無需包被;免洗 ELISA;省時省力；

4.體系穩(wěn)定：7天內(nèi)可隨時檢測;信號基本不變；

5.數(shù)據(jù)客觀真實(shí)：比值處理可有效去除背景熒光；假陽性率和價陰性率低；

6.高(空格)端檢測：只需簡單的酶標(biāo)儀就可以輕松搞定。

應(yīng)用：

HTRF已被證明在各種應(yīng)用中，包括GPCRs，激酶，表觀遺傳學(xué)，PPIs和包括細(xì)胞因子在內(nèi)的廣泛生物標(biāo)志物的量化。

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