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瓊脂糖預(yù)染預(yù)制膠電泳試劑盒使用中可能出現(xiàn)的問題解答

時間:2023/11/27閱讀:277
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瓊脂糖預(yù)染預(yù)制膠電泳試劑盒使用過程中可能出現(xiàn)一些問題,比如:如何選擇預(yù)制膠濃度,選擇什么體系,Marker條帶電泳清晰但樣品電泳很差,回收低,掛孔和圖像不好等原因,惠誠生物針對推出的該款預(yù)制膠進(jìn)行解答。


1、如何選擇預(yù)制膠濃度?

不同分子量對應(yīng)的預(yù)制膠濃度,實驗情況很復(fù)雜,下表僅供參考:

 2、能不能使用其他體系?

目前這款預(yù)制膠使用體系為TAE,不能在其他體系(如TBE/TPE)的電泳液中電泳;


3、Marker條帶電泳清晰,樣品電泳很差?

一般情況是樣本的問題,因為膠只是一個平臺,不改變核酸的結(jié)構(gòu)和形態(tài),具體解決方案如下:

A、調(diào)整電壓(一般降低);B、減少上樣量或者稀釋;C、用新的制備樣品;D、調(diào)整PCR 的條件(如退火溫度)等等。


4、為什么回收低?

若回收低,需要調(diào)高熔膠溫度和延長熔膠時間,具體原因如下:

A、膠是0.7cm 厚的標(biāo)準(zhǔn)膠,比用戶自配的膠在切膠的位置厚很多,因此在切膠的過程中切的膠要比自配的膠多;

B、膠孔比用戶原來自己的孔寬一點(diǎn)點(diǎn),用戶在切膠的過程中也會比自配的膠切的多。

這樣的話,用戶使用他們原來的習(xí)慣,在相同的時間膠沒有完(空格)全熔掉,回收量就會少很多。


5、出現(xiàn)掛孔的原因?

用戶在電泳液外面點(diǎn)樣,樣品因為沒有電泳液保護(hù),會很快擴(kuò)散到膠里,有可能形成掛孔。


6、圖形不好怎么辦?

預(yù)制膠因為在低溫時間長,電泳時最好比客戶經(jīng)常使用的電壓低一些,調(diào)低20-40伏特左右,會得到比較好的圖形。


7、電泳是一個系統(tǒng),任何原料都可能引起變化,任何改變也需要調(diào)整。根據(jù)實際需求,選擇方案。

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