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DNA 恒溫快速擴(kuò)增試劑盒膠體金試紙條型使用說明書

時間:2024/11/5閱讀:295
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【原理概述】 

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù):在常溫恒溫下(一般為 39 oC~42 oC), 在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白的幫助下,重組酶和引物形成復(fù)合體;進(jìn)行同源搜索并結(jié)合目的同源域,此時在該同源位置形成D-loop 區(qū)并開始進(jìn)行鏈交換;伴隨著重組酶從復(fù)合體上解離,聚合酶也結(jié)合到引物的 3’末端,開始鏈的延伸。依賴nfo 酶的作用,加入根據(jù)模板設(shè)計的特異的分子探針,使用膠體金技術(shù)(三明治夾心法)可以對最終結(jié)果進(jìn)行檢測。


組成含量
A buffer
1.6ml/管*1
B buffer0.15ml/管*1
正對照模板-II0.1ml/管*1
正對照引物探針 Mix-II0.07ml/管*1
試劑48T
使用說明書1份



【產(chǎn)品特點】 

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時 間短(僅需 15 min)等優(yōu)點,反應(yīng)組分為干粉狀態(tài),操作簡便,易于保存。 本試劑對設(shè)備要求低,金屬浴、水浴鍋等即 可進(jìn)行反應(yīng)操作,無需購買 PCR 擴(kuò)增儀等 價格高昂的專屬設(shè)備。

【引物設(shè)計】 

建議使用長度在30-35 bp 的引物,引物過短會影響擴(kuò)增速度和檢測靈敏度;下游引物的 5’端標(biāo)記一個修飾基團(tuán)(常用生物素)。引物設(shè)計避免形成二級結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增;擴(kuò) 增子長度建議在150-500 bp。

【膠體金探針設(shè)計】

在上下游引物中間,設(shè)計一段長度為46-52nt 與目的片段互補(bǔ)的序列;5’端修飾一個抗原 標(biāo)記(典型 FAM);在 5’端和 3’末端的中部 位置標(biāo)記一個 dSpacer(四氫呋喃,THF), 作為 nfo 的識別位點;3’末端標(biāo)記一個修飾 基團(tuán),例如胺基、磷酸基團(tuán)或 C3-Spacer 等。

【試劑盒儲存】 

1.儲存條件:儲存溫度 ≤ -20 °C 恒溫環(huán)境, 避光保存,避免重壓; 

2.產(chǎn)品有效期:14 個月; 

3生產(chǎn)日期見外包裝。


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