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凱氏定氮法的實驗原理是什么?

閱讀:8252        發(fā)布時間:2020-7-2

凱氏定氮法是通過測出樣品中的總含氮量再乘以相應的蛋白質(zhì)系數(shù)而求出蛋白質(zhì)的含量,此法的結果稱為粗蛋白質(zhì)含量。

 

原理:有機含氮化合物與濃硫酸共熱消化,氮轉(zhuǎn)化為氨,再與硫酸結合成硫酸銨。硫酸銨與強堿反應,放出氨。將氨蒸餾到過量的標準無機溶液中,再用標準堿溶液進行滴定。根據(jù)測得的氨量,計算樣品的總氮量。、試劑與材料:濃硫酸、硫酸鉀-硫酸銅粉末(稱取80g硫酸鉀和20g硫酸銅(五水),0.3g二氧化硒研細混合)、30%氫氧化鈉溶液、2%硼酸溶液、0.01M標準鹽酸、混合指示劑(田氏指示劑)儲存液(取50ml0.1%甲烯藍乙醇溶液與200ml0.1%甲基紅溶液混合,儲存于棕色瓶中備用。

賽亞斯凱氏定氮儀概述:

KDN凱氏定氮儀是依據(jù)經(jīng)典(凱氏定氮)方法設計的自動測氮蒸餾系統(tǒng)。儀器主要工作流程有:自動加水(含自動水位檢測功能)、自動加堿(按鈕控制)、手動加酸(手工配置)、自動蒸餾(按鈕控制)等幾部分。該儀器操作簡單;使用安全、可靠;省時、省力;適用于糧油檢測、飼料分析、植物養(yǎng)分測試、土肥檢測、醫(yī)藥、化工等行業(yè)的分析、教學及研究中,是操作使用人員的理想工具。2.工作原理 (凱氏原理):

蛋白質(zhì)是含氮的有機化合物。食品和硫酸及催化劑一同加熱消化,使蛋白質(zhì)分解,分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然后在堿化蒸餾作用下使氨游離,釋放出來的氨氣和水蒸氣一起經(jīng)過冷凝管冷凝后,進入裝有硼酸的錐形瓶中。被硼酸吸收后再用硫酸或鹽酸標準溶液滴定,根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù),即得到蛋白質(zhì)含量。

2.1.(消化爐部分)有機物中的銨根在強熱和催化劑及濃H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4

  反應式為: 2NH2-+H2S04+2H+=(NH4)2S04

2.2.(蒸餾器部分)裝有消化后樣品的消化管在高溫蒸汽作用下與堿作用,放出NH3 和水蒸氣,收集于H3BO3 溶液中

  反應式為: (NH4)2SO4+2NaOH高溫蒸汽=2NH3↑+2H2O+Na2SO4

  2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O

2.3. (滴定部分)用已知濃度的H2SO4(或HCI)標準溶液滴定,根據(jù)HCI消耗量計算出氮的含量,然后乘以相應的換算因子,得到蛋白質(zhì)的含量

  反應式為: (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3

   (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3

3.操作步驟:

取樣→    消化 →   蒸餾→    滴定 →   計算

4.整套儀器組成:

含消化爐(本公司供選配KDN-04C、KDN-08C、KDN-20C等消化爐型號)和KDN系列凱氏定氮儀蒸餾器組成。

二.技術參數(shù)

1.測定品種:糧食、飼料、食品、乳制品、飲料、土壤、水、藥物、沉淀物和化學品等。

2.工作方式:半自動。

3.測定數(shù)量:采用單個連續(xù)蒸餾測量。

4.測定范圍:含氮在0.1~200mgN(毫克氮) (含氮量0.1%~99%)

5.回收率:≥99%(相對誤差,包括消化過程)

6.重復率:相對標準偏差<±1%

7.工作時間:蒸餾時間5-15分鐘( 根據(jù)樣品和含氮量的不同而定)

8.額定電壓: 220V/50Hz。

9.  額定功率:800W

10.冷卻水消耗: 3-4L/min(水溫低于25度)

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