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進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)要進(jìn)行哪些步驟

閱讀:1918      發(fā)布時(shí)間:2022-9-20
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  常用的計(jì)數(shù)方法主要有手工計(jì)數(shù)(如利用改良牛鮑計(jì)數(shù)板)和細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)(經(jīng)費(fèi)充裕組常備)。從原理來說,這兩種方法基本類似,大致是通過臺(tái)盼蘭或者熒光染料染色后,用肉眼或者用攝像機(jī)拍照后進(jìn)行計(jì)數(shù),差別就是前者人累,且精準(zhǔn)度和穩(wěn)定性較差;后者不累人,且精準(zhǔn)度和穩(wěn)定性較好。
  單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)的第一步是單細(xì)胞懸液的制備,而懸液制備中細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性直接影響單細(xì)胞測(cè)序的數(shù)據(jù)質(zhì)量。
  1.  計(jì)數(shù)板
  用96%酒精沖洗計(jì)數(shù)板后,用干凈鹿皮擦凈,另擦凈蓋片一張;把蓋片覆在計(jì)數(shù)板上面,使之微微移向一側(cè),露出計(jì)數(shù)板臺(tái)面少許,以便滴加細(xì)胞懸液;
  2.  染色
  取吸管1 支,伸入培養(yǎng)瓶中,輕輕反復(fù)吹打細(xì)胞懸液使細(xì)胞重懸均勻后,立即吸細(xì)胞懸液少許,向另一離心管中滴入細(xì)胞懸液9 滴,再滴入臺(tái)盼藍(lán)染液1 滴,混勻,置2~3 分種;
  3.  加懸液
  把計(jì)數(shù)板平放在顯微鏡臺(tái)上,立即從計(jì)數(shù)板邊緣輕輕滴1~2 滴已染色的細(xì)胞懸液,使之充滿計(jì)數(shù)板和蓋片間空隙中;
  4.  鏡檢
  鏡下觀察可見細(xì)胞分散各處,健康細(xì)胞胞體完整,透明不著色,凡著色細(xì)胞均為不健康者。計(jì)算四角大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù);壓中線者只計(jì)算左線和上線者,右線和下線不計(jì)算在內(nèi)(即僅計(jì)算壓兩個(gè)邊的細(xì)胞)。
  5.  接種培養(yǎng)
  通過計(jì)數(shù)測(cè)知懸液中細(xì)胞數(shù)后,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞數(shù)量向培養(yǎng)容器中接種。細(xì)胞接種數(shù)量隨實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、血清含量和?xì)胞生物性狀而定;一般接種量在1~10x105細(xì)胞/毫升范圍,實(shí)驗(yàn)周期短,希望細(xì)胞增殖較快時(shí),接種量可大些。用含血清量大的培養(yǎng)液培養(yǎng)胚胎來源細(xì)胞、無限細(xì)胞系和惡性細(xì)胞系時(shí),細(xì)胞接種數(shù)量不宜太大。

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