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用金納米粒子標(biāo)記: 分離和分離金納米粒子偶聯(lián)物

閱讀:816      發(fā)布時(shí)間:2023-5-19
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凝膠過濾是分離金納米粒子標(biāo)記結(jié)合物的最佳方法。

透析會產(chǎn)生更多變化的結(jié)果;在我們的實(shí)驗(yàn)室中,嘗試通過透析將未結(jié)合的金納米粒子與蛋白質(zhì)和抗體結(jié)合物分離,導(dǎo)致金降解,有時(shí)還會導(dǎo)致蛋白質(zhì)大量損失;因此,我們不推薦通過透析來分離偶聯(lián)物。

膜離心可能有用,特別是在標(biāo)記非常大的蛋白質(zhì)時(shí);截留分子量為 50,000 或 100,000 的微量濃縮器將允許 undecagold 和 Nanogold® 穿過膜。


選擇您的凝膠過濾介質(zhì)

層析介質(zhì) (14k)

選擇一種凝膠,它可以最好地分離金結(jié)合物和過量存在的組分:這將是一種凝膠,其中結(jié)合物的 MW 接近 MW 分級范圍的頂部,過量的試劑(無論是金納米顆?;蛭礃?biāo)記的較小分子)接近該范圍的底部。注意:如果您擔(dān)心聚集的可能性,請選擇 MW 范圍上限明顯高于金納米粒子偶聯(lián)物 MW 的凝膠。


Nanogold® 標(biāo)記的 Fab' 片段的分離示例如下所示:

Nanogolf-Fab' (11k) 的色譜圖

所需產(chǎn)物(灰色陰影)與較大的 F(ab') 2綴合物和過量未結(jié)合的 Nanogold® 分離。要獲得更高的純度,應(yīng)將 12-14 級分合并并再次分離。




要對凝膠或印跡進(jìn)行染色以獲得清晰、快速的肉眼結(jié)果:

  • 銀增強(qiáng)方案:
    使用 LI Silver 對 Nanogold® 標(biāo)記的分子進(jìn)行凝膠染色

  • 使用GoldEnhance Blots
    增強(qiáng) 黃金 在許多情況下,黃金顯影劑優(yōu)于白銀。



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