Pierce BCA 蛋白質(zhì)檢測(cè)試劑盒是一種高精度、與去污劑兼容的蛋白質(zhì)檢測(cè)試劑盒，用于測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。 Pierce BCA 試劑可準(zhǔn)確測(cè)定蛋白質(zhì)研究中遇到的大多數(shù)樣品類型的蛋白質(zhì)濃度。 Pierce BCA 測(cè)定可用于評(píng)估全細(xì)胞裂解物、親和柱級(jí)分、純化蛋白質(zhì)樣品的產(chǎn)量，以及監(jiān)測(cè)工業(yè)應(yīng)用中的蛋白質(zhì)污染。與大多數(shù)染料結(jié)合方法相比，BCA 測(cè)定法受蛋白質(zhì)成分差異的影響要小得多，因此濃度精度更高。
提供的試劑盒選項(xiàng)包括 Pierce 免稀釋 BSA 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，這是一組七個(gè)預(yù)稀釋的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品，包裝在多通道移液器友好的試管中。試管條包括一個(gè)空管，使用戶能夠添加自己的樣品緩沖液以進(jìn)行空白扣除。
BCA 蛋白質(zhì)檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)包括：
• 比色法— 目視估計(jì)或使用標(biāo)準(zhǔn)分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀在 562 nm 處進(jìn)行測(cè)量
• 準(zhǔn)確— 顯示通過(guò)染料結(jié)合方法 (Bradford) 觀察到的蛋白質(zhì)間變異的一半
• 兼容—不受大多數(shù)離子型和非離子型去污劑典型濃度的影響
• 測(cè)定時(shí)間短— 孵育30分鐘；比傳統(tǒng)的 Lowry 方法更簡(jiǎn)單，速度快四倍
• 檢測(cè)范圍寬 — BSA 的線性工作范圍為 20 至 2000 µg/mL
• 靈敏— 使用增強(qiáng)協(xié)議檢測(cè)低至 5 µg/mL
•不再需要連續(xù)稀釋— 套件選項(xiàng)包括稀釋- 免費(fèi) BSA 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，無(wú)需在生成標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)進(jìn)行連續(xù)稀釋 測(cè)定原理 BCA 蛋白質(zhì)
測(cè)定
結(jié)合在堿性介質(zhì)中通過(guò)蛋白質(zhì)將Cu 2+還原 為 Cu 1+的特性與高靈敏度以及亞銅陽(yáng)離子 (Cu 1+）由二辛可寧酸（BCA）制成。第一步是銅與蛋白質(zhì)在堿性環(huán)境中螯合，形成淺藍(lán)色復(fù)合物。在這種稱為縮二脲反應(yīng)的反應(yīng)中，含有三個(gè)或更多氨基酸殘基的肽在含有酒石酸鈉鉀的堿性環(huán)境中與銅離子形成有色螯合物。
在顯色反應(yīng)的第二步中，BCA 與第一步中形成的還原（亞銅）陽(yáng)離子發(fā)生反應(yīng)。兩個(gè) BCA 分子與一個(gè)亞銅離子螯合產(chǎn)生深紫色反應(yīng)產(chǎn)物。 BCA/銅復(fù)合物是水溶性的，并且隨著蛋白質(zhì)濃度的增加，在 562 nm 處表現(xiàn)出很強(qiáng)的線性吸光度。該復(fù)合物的靈敏度（檢測(cè)下限）比第一個(gè)反應(yīng)的淡藍(lán)色靈敏約 100 倍。
該反應(yīng)受到蛋白質(zhì)氨基酸序列中四個(gè)氨基酸殘基（半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸和色氨酸）的強(qiáng)烈影響。然而，與考馬斯染料結(jié)合方法（即 Bradford）不同，通用肽主鏈也有助于顏色形成，有助于最大限度地減少蛋白質(zhì)成分差異引起的變異性。
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