產(chǎn)品名稱：大鼠腫瘤壞死因子Uβelisa試劑盒

規(guī)格：   48/96T

方法：   雙抗夾心法  間接法

保存：  試劑盒未拆開，4℃保存。已拆開，標(biāo)準(zhǔn)品-20℃保存，其它4℃保存。

用途：  僅供科研

品牌：瑞番

陽性對(duì)照：
陽性對(duì)照的基本組成應(yīng)該盡量與檢測(cè)樣本的組成*，一般陽性對(duì)照多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì)，加入一定量的待檢物質(zhì)。

陰性對(duì)照：
zui好先行檢測(cè)確定其中不含待檢物質(zhì)。比如：檢測(cè)人血清標(biāo)本時(shí)，陰性對(duì)照應(yīng)該選擇正常人血清；檢測(cè)免疫動(dòng)物血清中抗體效價(jià)時(shí)，陰性對(duì)照應(yīng)該選擇該動(dòng)物的免疫前血清。
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雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。

3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

大鼠腫瘤壞死因子Uβelisa試劑盒試劑盒注意事項(xiàng):
}1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
}2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
}3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
}4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
}5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
}6．底物請(qǐng)避光保存。
}7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
}8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
}9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
}10．如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

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