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紫外可見分光分度計(jì)吸光度范圍及誤差影響
紫外可見分光分度計(jì)具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)，是生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的實(shí)驗(yàn)方法。許多物質(zhì)的測(cè)定都采用分光光度法。在分光光度計(jì)中，將不同波長(zhǎng)的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時(shí)，便可得到與不同波長(zhǎng)相對(duì)應(yīng)的吸收強(qiáng)度。
紫外可見分光分度計(jì)的吸光度范圍應(yīng)該是在0.3-0.7之間，一般在0.2-0.8的范圍里準(zhǔn)確。在分析過程中，很多人都是做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后去測(cè)定樣品，很少有人關(guān)心誤差方面的問題。
在分光分析中，化學(xué)條件引起的誤差比較大，有關(guān)吸光度測(cè)量的誤差，很多人都從書上看的，認(rèn)為吸光度在0.2-0.8之間誤差小，在0.434處最小，但不是特清楚理論根據(jù)。還有一個(gè)問題，如果吸光度在2.0，難道我們就去稀釋樣品，讓其吸光度在0.2-0.8的范圍內(nèi)嗎？反之，如果吸光度在0.02，那我們是不是要濃縮樣品呢？
對(duì)此有兩種不同的看法：
1.如果吸光度不在0.2-0.8之間，我們要去稀釋或濃縮樣品來進(jìn)行測(cè)量；
2.如果吸光度不在0.2-0.8之間，直接進(jìn)行測(cè)量，因?yàn)橄♂尰驖饪s樣品產(chǎn)生的誤差遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于直接測(cè)量吸光度產(chǎn)生的誤差。
在分光光度計(jì)中，透射比的標(biāo)尺是均勻的。吸光度與透射比為負(fù)對(duì)數(shù)關(guān)系，所以吸光度的標(biāo)尺刻度是不均勻的。因此，對(duì)于同一臺(tái)儀器，讀數(shù)的波動(dòng)對(duì)透射比來說，應(yīng)基本為一定值;而對(duì)吸光度來說，它的讀數(shù)則不在為定值。由分光光度計(jì)讀數(shù)標(biāo)尺上吸光度與透射比的關(guān)系可以看出，吸光度越大，讀數(shù)波動(dòng)所引起的吸光度誤差也越大。