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上海創(chuàng)凌生物科技有限公司>技術文章>SILAC-exosome定量分析服務

技術文章

SILAC-exosome定量分析服務

閱讀:1329          發(fā)布時間:2019-12-26

、簡介:

Exosome(外泌體)是具有脂質雙層膜結構、直徑約為30-150nm、密度在1.13-1.21g/ml的膜性囊泡。在exosome的囊泡結構中含有細胞來源相關的蛋白質、核酸、脂質和小分子等物質,能作為信號分子傳遞給其他細胞以進行細胞間通訊。研究發(fā)現exosome在眾多生理、病理過程中發(fā)揮著著重要作用。鑒于不同細胞分泌的exosome具有不用的組成成分和功能,故而exosome有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用,此外,基于exosome的膜性結構,亦可作為靶向藥物的載體進行疾病治療。Exosome的這些特性使其成為當前的熱門研究對象。

Exosome在細胞中的蛋白質含量極低,分離并獲取足量的exosome蛋白是進行LC-MS分析的前提條件。SILAC結合LC-MS就能很好的進行exosome蛋白的定量比較分析,體現在:(1)SILAC是體內標記,自然在exosome中的蛋白質也是SILAC標記的;(2)所需的蛋白量少,SILAC標記的和未標記的exosome蛋白各15-20μg足夠進行MS鑒定與定量;(3)蛋白質提取和后續(xù)操作步驟極為簡單方便,只需提取exosome蛋白、定量、1:1混合即可。(3)蛋白質定量和分析軟件成熟(Maxquant和Perseus),結果分析方便直觀。

二、服務方案:

(一)整體服務:

只需客戶提供細胞即可,我方負責完成:

SILAC培養(yǎng)基制備。

細胞SILAC標記及標記效率MS檢測;

SILAC標記細胞與非標記細胞擴增、exosome分離及exosome蛋白質提取;

提取蛋白質定量、1:1混合、SDS-PAGE分離及染色;

切割條帶,分別進行LC-MS測試;

MS數據分析,完成蛋白質的鑒定及定量分析,篩選差異表達蛋白;

差異表達蛋白常規(guī)生物信息學分析;

(二)合作共贏方案:

原則是通過協商簽訂合同,雙方各完成一部分實驗內容。

客戶方需從我方購買相應的SILAC培養(yǎng)基及耗材。我方提供細胞SILAC標記的實驗方案,協助客戶完成細胞的SILAC標記過程。

標記完成后,需用LC-MS鑒定細胞標記效率。該步驟需交由我方完成鑒定。

終正式實驗的蛋白質樣品,需交由我方完成MS鑒定和定量分析。

三、其他特色:

SILAC培養(yǎng)基。我方能生產多種類型的SILAC培養(yǎng)基(K6R6、K4R6、K6R8、K8R10等),7-10個工作日發(fā)貨,免去客戶從國外進口SILAC培養(yǎng)基及其標記氨基酸的漫長貨期。

SILAC培養(yǎng)基,500ml起訂。

我方同時銷售SILAC相關的試劑/耗材(dialyzed FBS,filter等),歡迎咨詢。

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