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技術(shù)文章

Zeta Life公司轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞經(jīng)驗分享

閱讀:1973          發(fā)布時間:2020-3-26

為了轉(zhuǎn)染raw 264.7小鼠巨噬單核細胞我們實驗室嘗試了lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等其它轉(zhuǎn)染試劑,對于我們8000bp的質(zhì)粒DNA基本轉(zhuǎn)染后都沒有熒光信號;師兄在中山大學(xué)的同學(xué)給我們推薦了他們實驗室用Zeta Life Advanced DNA RNA貨號AD600050轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞經(jīng)驗分享。

按照中山大學(xué)師兄給出的方法并結(jié)合我實驗室情況我把自己在6孔板轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞的相關(guān)經(jīng)驗整理如下,希望對你轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞有一定的幫助,下面是我*用轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞的熒光和細胞明場圖片,后期進一步優(yōu)化后的新圖片我也會隨后呈上:

 

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一、質(zhì)粒DNA準(zhǔn)備

1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul(注意:①溶解于無菌雙蒸水或超純水;②無內(nèi)毒素),我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素

二、操作流程

1、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板,細胞匯合度在70%左右,再進行轉(zhuǎn)染。

2、復(fù)合物制備:將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent貨號AD600050轉(zhuǎn)染試劑按照1:1(12ug:12ul)關(guān)系直接混合,用移液器吹吸10-15次混勻,室溫靜止10-15分鐘。

3、將復(fù)合物加入*培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板,并輕輕混勻,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)(不建議把復(fù)合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面,我后期會進一步摸索此條件)。

4、轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率

三、Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息:

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

數(shù)量

報價

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600025

0.25ML

1

1590

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600050

0.5

1

2390

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600075

0.75

1

2890

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600150

1.5ML

1

4490

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600500

5ML

1

電詢

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD601000

10ML

1

電詢

四、注意事項:

1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如:lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等轉(zhuǎn)染試劑;

2細胞培養(yǎng)基:Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清,Gibco公司DMEM;

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