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裸鼠皮下成瘤實驗介紹2024年已更新

裸鼠腫瘤模型

 

無胸腺裸鼠（Nude Mouse，簡稱裸鼠）目前已成為醫(yī)學生物學研究領域中*的實驗動物模型，它是先天性胸腺缺陷的突變小鼠，裸鼠接種成活的腫瘤對化療藥物的敏感性與臨床所見十分相近。根據腫瘤細胞的特性和接種細胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤大小測量一般為1周兩次，游標卡尺測量腫瘤最長和最短部位，腫瘤不宜生長過大，一般不要超過1000mm3。

 

 裸鼠腫瘤模型實驗步驟

1、細胞的狀態(tài)是成瘤實驗的關鍵，所以細胞生長狀態(tài)一定要好，取處于對數生長期的細胞，細胞達80-90%左右密度為宜。收集細胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

 

2、胰酶消化細胞后用預冷的PBS洗兩遍，目的為去除細胞中的血清。

 

3、用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細胞量為1-5×10^6個細胞/支，接種體積為0.1ml，因此細胞懸液的濃度為1-5×10^7個細胞/ml。

 

4、細胞消化后應盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時內完成，途中將細胞懸液放在冰上降低細胞的代謝。

 

5、選擇的裸鼠一般在5-8周齡，體重18-20g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部、腹股溝中上部。

 

6、接種前用槍將細胞懸液充分的吹散，防止細胞成團而降低細胞成活率。

 

7、接種時，針頭在皮下進針深一點，約1cm深，減少注射后細胞懸液從針眼溢出。

 

8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。

 

9、接種后一周左右可以見到皮下開始出現腫塊。

 

10、根據腫瘤細胞的特性和接種細胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤不宜生長過大，一般不要超過1000mm3 ，腫瘤負荷過大常常會以違背動物倫理而被雜志社刁難(因為這個問題悲慘地被plos one拒過稿）。

 

11、腫瘤大小測量一般為1周兩次，游標卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長軸，b為短軸)。

 

12、皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等