1. 概要

*是黃曲霉和寄生曲霉的有毒的代謝產(chǎn)物，主要存在于谷物、堅果和飼料中。1993年*B1被世界衛(wèi)生組織（WHO）的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為Ⅰ類致癌物，是一類毒性*的劇毒物質(zhì)。它被證明對人和動物的肝臟、腎臟等組織和器官具有很大的危害。中國標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：*B1在玉米、大米、小麥中*分別不得超過20、10、5μg/kg，各種飼料中*B1的*為10-50μg/kg。*總量試劑盒不僅可以對*B1，而且可以對其他*（B2、G1、G2）進(jìn)行全面的檢測。

1. 原理

測定的基礎(chǔ)是抗原-抗體反應(yīng)。微孔板上包被有抗抗體。加入*標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、酶標(biāo)抗原和抗體后，游離的*B1、B2、G1、G2與酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合抗體，抗體或抗體結(jié)合物與固定在微孔板上的抗抗體再結(jié)合，沒有結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗原及抗體被洗去，加入TMB底物顯藍(lán)色，加入終止液后顏色由藍(lán)變黃，用酶標(biāo)儀在450nm處檢測，吸光值與樣品中*總量含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出*總量的含量。

1. 試劑盒的組成

1. 包被有抗抗體的96微孔板：1塊（96 孔，12 條×8 孔）
2. AFT 標(biāo)準(zhǔn)品：0 ng/mL、 0.25ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL           1 瓶 × 1.0mL
3. AFT酶標(biāo)抗原：               1 瓶 × 10mL
4. AFT抗體：                   1 瓶 × 10mL
5. 10× 濃縮洗滌液：             1 瓶 × 50mL
6. AFT稀釋緩沖液A：           1 瓶 × 50mL
7. AFT稀釋緩沖液B：           1 瓶 × 50mL
8. 顯色底物TMB：              1 瓶 × 17mL
9. 終止液：                     1 瓶 × 7mL
10. 試劑盒說明書：               1份
11. 質(zhì)檢報告：                   1份

1. 需要的儀器、試劑

1）儀器  

1. 酶標(biāo)儀450nm（iELisa全自動酶標(biāo)儀或相當(dāng)者）
2. 微量移液器：20μL-200μL單道，100μL-1000μL單道, 50μL-300μL八道
3. 多功能旋轉(zhuǎn)混合器（或者搖床、高速均質(zhì)器）
4. 酶標(biāo)板振蕩器
5. 渦旋混合器
6. 氮?dú)獯蹈蓛x
7. 50mL離心管
8. 1.5mL離心管
9. 離心機(jī)
10. 定性濾紙
11. 過濾漏斗
12. 天平：感量0.01g

1. 試劑

1. 樣品提取液70%甲醇：取700mL甲醇，加300mL純水，混勻。
2. 純水（蒸餾水、去離子水）、正己烷、三氯甲烷、甲醇
3. 8.  注意事項
4. 室溫低于20℃或試劑及樣品未回到室溫（20- 25℃）會導(dǎo)致數(shù)值偏低。
5. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥過久的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板排干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
6. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和顯色液對光敏感，避免直接暴露在光線下。
7. 混合要均勻，洗板要*（包括加樣品和標(biāo)準(zhǔn)液的時候都必需充分混合均勻）。
8. 終止液為強(qiáng)酸性物質(zhì)，避免接觸皮膚。
9. 不要使用過了有效期的試劑盒，也不要混合使用不同批次的試劑盒，這樣會引起測定結(jié)果不準(zhǔn)確。
10. 試劑盒的儲存條件是2-8℃，切勿冷凍。

11. 9.  試劑盒的性能指標(biāo)

12. 檢測限LOD: 谷物1.5ppb(μg/kg)，飼料4.0ppb，植物油1.5ppb(μg/kg)，醬油、醋1.5ppb(μg/kg)，糕點1.5ppb(μg/kg)，酒類1.5ppb(μg/kg),發(fā)酵液3.5ppb。（LOD：空白樣品測定值+2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差SD）
13. 定量限LOQ: 谷物3.0ppb，飼料7.5ppb，植物油2.5ppb(μg/kg)，醬油、醋2.5ppb(μg/kg)，糕點2.5ppb(μg/kg)，酒類3.0ppb，發(fā)酵液6ppb。
14. 定量檢測范圍：谷物3.0-25ppb，飼料7.5-60ppb，植物油2.5-20ppb，醬油、醋2.5-20ppb，糕點2.5-20ppb，酒類3.0-25ppb,發(fā)酵液6.0-50ppb。
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