技術(shù)文章
CAS檢測培養(yǎng)基原理和使用方法
閱讀:40 發(fā)布時間:2025-5-30一、氫氧化細菌和鐵載體的簡介:
氫氧化細菌(Hydrogen-oxidizing bacteria)是一類能通過氧化氫氣獲得能量,固定二氧化碳作為唯yi碳源的微生物,土壤中分布廣泛,尤其是豆科植物根際大量存在。氫氧化細菌沒有單獨的分類,多分布在假單胞菌屬、副球菌屬、黃桿菌屬、分支桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、諾卡氏菌屬、醋酸桿菌屬及棒桿菌屬等。絕大部分氫氧化細菌是兼性化能自養(yǎng)型,它們可以自養(yǎng)生長、異養(yǎng)生長、甚至混合營養(yǎng)生長,好氧或兼性厭氧。氫氧化細菌屬于植物根際促生菌,在農(nóng)作物增產(chǎn)方面有巨大的應用潛力,所以其各種促生機制的研究已成為熱點,其中分泌鐵載體就是幾種重要的促生機制之一。
鐵載體(siderophore)是一類能特異性結(jié)合鐵離子并供給微生物細胞的低分子量物質(zhì)。鐵元素是微生物生長的必需元素,在缺鐵的環(huán)境中微生物會分泌鐵載體螯合鐵離子滿足自身生長需要。目前,常用的鐵載體檢測方法為Schwyn和Neilands發(fā)明的通用CAS瓊脂平板法,當細菌產(chǎn)生的鐵載體與由鉻天青S(CAS)、十六烷基三甲基溴化銨(HDTMA)、鐵離子組成的藍色復合物結(jié)合后,會奪走鐵離子,使細菌周圍的培養(yǎng)基顏色由藍色變?yōu)殚冱S色,出現(xiàn)鐵載體分泌圈,有利于判斷細菌是否產(chǎn)生鐵載體。
二、CAS檢測培養(yǎng)基
1. 產(chǎn)品用途:用于細菌鐵載體篩選試驗。
2. 配方(mg/L):
鉻天青S(CAS) | 60.5 |
十六烷基三甲基溴化銨(HDTMA) | 72.9 |
六水氯化鐵 | 2.645 |
二水磷酸二氫鈉 | 295.25 |
十二水磷酸氫二鈉 | 1213.5 |
氯化銨 | 125 |
磷酸二氫鉀 | 37.5 |
氯化鈉 | 62.5 |
瓊脂 | 9000 |
pH值6.8±0.1(25℃) |
三、試驗方法:
1. 稱取本品10.87g,加熱煮沸完-全溶解于1000mL蒸餾水中,分裝三角瓶,116℃高壓滅菌30分鐘,冷卻至50℃時,傾入無菌平皿,備用;
2. 用接種環(huán)挑取質(zhì)控菌株新鮮培養(yǎng)物點種到平板上;
3. 放置35℃需氧培養(yǎng)24小時,記錄試驗結(jié)果。
四、試驗結(jié)果判斷:
接種以下質(zhì)控菌株,放置于35℃需氧培養(yǎng)24小時。
質(zhì)控菌株 | 菌株編號 | 接種量(CFU) | 參比或計數(shù)培養(yǎng)基 | 質(zhì)控結(jié)果 |
銅綠假單胞菌 | ATCC 9027 | / | / | 菌落周圍有黃色環(huán) |
圖1 銅綠假單胞菌ATCC 9027在CAS檢測培養(yǎng)基菌落特征
注:本文屬海博生物原創(chuàng),未經(jīng)允許不得轉(zhuǎn)載。