詳細介紹
相對定量分析方法 :
2-ΔΔCt
前提:目標序列和內參序列的擴增效率接近100%且偏差在5%以內
1、用內參基因的CT值歸一目標基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、計算表達水平比率:
2 –ΔΔCT=表達量的比值
參數規(guī)格:
產品名稱:同艾特韋病毒PCR檢測試劑盒說明書
英文名稱:Egtved Virus(VHSV)RTPCR
貨號:YS30685-R
產品規(guī)格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
具有下列特點:
1.根據 指標的保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個數量級,可以達到幾百拷貝/反應。
3.即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6.本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器(2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
JIP3 antibody原裝、分裝Wako 073-03071 Gellan Gum
SORBS1 antibody原裝、分裝Wako 136-03032 Methyl Red
USP6 antibody原裝、分裝Wako 031-04592 Creatinine
Human Histone H3 (di methyl K79) peptide原裝、分裝Wako 021-17801 BES-So-AM
Human Histone H3 (tri methyl K79) peptide原裝、分裝Wako 028-07982 γ-Butyrolactone
Human Histone H4 peptide原裝、分裝Wako 043-18804 和光純藥 現貨
Fibrillarin antibody [38F3]原裝、分裝Wako 034-06363 Octanoic Acid
pan CEACAM antibody [D14HD11]原裝、分裝Wako 058-07681 EasySeparator 1set
HLA G antibody [MEM-G/11]原裝、分裝Wako 039-01335 和光純藥 現貨Plasminogen antibody (Biotin)原裝、分裝(R)-(-)-α-氧基苯(>98.0%(GC)(T))
PAI1 antibody (Biotin)原裝、分裝(R)-(+)-α-氧基-α-(三氟基)苯(>98.0%(GC)(T))
PPAR alpha antibody (Biotin)原裝、分裝(R)-(+)-α-氧基-α-(三氟基)苯(>98.0%(GC)(T))
Protein C antibody (Biotin)原裝、分裝(S)-(-)-α-氧基-α-(三氟基)苯(>98.0%(GC)(T))
IgG antibody原裝、分裝(S)-(-)-α-氧基-α-(三氟基)苯(>98.0%(GC)(T))
Detyrosinated alpha Tubulin antibody原裝、分裝(+)-α-氧基-α-(三氟基)苯酰氯(>98.0%(GC))
LC3B antibody原裝、分裝(+)-α-氧基-α-(三氟基)苯酰氯(>98.0%(GC))
Mouse AP3B2 peptide原裝、分裝(-)-α-氧基-α-(三氟基)苯酰氯(>98.0%(GC))
E. coli antibody - Azide free原裝、分裝(-)-α-氧基-α-(三氟基)苯酰氯(>98.0%(GC))
同艾特韋病毒PCR檢測試劑盒說明書mTOR (phospho S2448) antibody原裝、分裝PCR產物純化回收試盒
alpha 1d Adrenergic Receptor antibody原裝、分裝PCR產物純化回收試盒
GW182 antibody原裝、分裝多功能DNA純化回收試盒
ADRA1B antibody原裝、分裝多功能DNA純化回收試盒
Native human Plasmin protein原裝、分裝多功能DNA純化回收試盒
Native Human Fibrinogen protein原裝、分裝AidQuick Oligo Purification Kit
寡核苷純化試盒
AMH antibody原裝、分裝AidQuick PAGE Extraction Kit
聚烯酰胺凝膠DNA回收試盒
DEGA antibody原裝、分裝凝固全血基組DNA提取系統(tǒng)
XRCC1 (phospho S518 + T519 + T523) antibody原裝、分裝凝固全血基組DNA提取系統(tǒng)
注意事項:
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率佳。
?5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。