詳細(xì)介紹
相對定量分析方法 :
2-ΔΔCt
前提:目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100%且偏差在5%以內(nèi)
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、計算表達(dá)水平比率:
2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:鉛黃腸球菌PCR檢測試劑盒規(guī)格
英文名稱:Enterococcus casseliflavusPCR
貨號:YS30708-R
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
具有下列特點:
1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個數(shù)量級,可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
ORC1 antibody [TK 1/2]原裝、分裝1-醇,超脫水 用于有機(jī)合成 71-23-8
Hsp60 antibody [4B9/89]原裝、分裝氯化鋅,四呋喃溶液 7646-85-7
Hsp60 antibody [2E1/53]原裝、分裝二基亞砜67-68-5咖啡標(biāo)準(zhǔn)品331-39-5 1
FGFR4 antibody原裝、分裝橙皮素 1257-08-5表兒茶素沒食子酯
RAC1 + Cdc42 (phospho S71) antibody原裝、分裝50-70-4山梨醇665-66-7鹽金剛胺
Human Histone H3 (phospho S28) peptide原裝、分裝6-氯煙5326-23-8
Insulin Receptor alpha antibody原裝、分裝環(huán)酰胺852403-68-0/139970-56-2
c-Kit antibody原裝、分裝井岡37248-47-8睪58-18-4
EPC1 antibody原裝、分裝甘油三十七酯2438-40-6Pyrin antibody原裝、分裝7-(二氨基)香豆素-3-羧己酯(>98.0%(HPLC))
Estrogen Related Receptor gamma antibody原裝、分裝7-羥基香豆素-3-羧(>98.0%(HPLC))
CIITA antibody原裝、分裝4-二氨基偶氮苯-4'-(>97.0%(HPLC)(T))
FOXH1 antibody原裝、分裝4-二氨基偶氮苯-4'-(>97.0%(HPLC)(T))
TCP1 delta antibody原裝、分裝7-二氨基-4-基香豆素(>98.0%(GC)(T))
FOXD1/BF-2 antibody原裝、分裝7-二氨基-4-基香豆素(>98.0%(GC)(T))
EKLF / KLF1 antibody原裝、分裝基鈣黃綠素藍(lán)水合物[用于配位滴定銅時的指示]
FOXJ2 antibody原裝、分裝6,7-亞二氧基-4-基-3-馬來酰亞胺香豆素(>98.0%(HPLC)(N))
TAF7L antibody原裝、分裝4-基-6,7-亞基二氧代香豆素(>99.0 %(GC))
鉛黃腸球菌PCR檢測試劑盒規(guī)格CCNB1IP1 antibody [2114C2a]原裝、分裝高保真PCR擴(kuò)增試盒
PDCD11 antibody [158C1a]原裝、分裝高保真PCR擴(kuò)增試盒
NCBP2 antibody [2613C3a]原裝、分裝PCR enhancer
Nmnat1/NMNAT antibody [2642C5a]原裝、分裝PCR enhancer
SSNA1 antibody [3053C6a]原裝、分裝dNTP Mixture each 2.5mM solution
CNNM3 antibody [2190C3a]原裝、分裝dNTP Mixture each 2.5mM solution
AZI1 antibody原裝、分裝dNTP Mixture each 2.5mM solution
DOCK7 antibody [3540C1a]原裝、分裝dNTP Mixture each 10mM solution
CEP78 antibody原裝、分裝dNTP Mixture each 10mM solution
注意事項:
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實驗結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。
?5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。