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細(xì)胞培養(yǎng)常用設(shè)備及實(shí)驗(yàn)技巧

閱讀:804        發(fā)布時(shí)間:2021-4-8

細(xì)胞培養(yǎng)常用設(shè)備及實(shí)驗(yàn)技巧

常用設(shè)備

 

準(zhǔn)備室的設(shè)備:

 

單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜(放置未消毒物品)、儲品規(guī)(放置消毒過的物品)、包裝臺。

 

配液室的設(shè)備:

 

扭力天平和電子天平(稱量藥品)、PH計(jì)(測量培養(yǎng)用液PH值)、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液)。

 

培養(yǎng)室的設(shè)備:

 

液氮罐、儲品柜(存放雜物)、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱(-80℃)、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺(書寫實(shí)驗(yàn)記錄)。必須放在無菌間的設(shè)備:離心機(jī)(收集細(xì)胞)、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱(孵育培養(yǎng)物)、水浴鍋、三氧消毒殺菌機(jī)、4℃冰箱(放置serum和培養(yǎng)用液)。

 

無菌操作

 

無菌室的滅菌:

 

1.定期打掃無菌室:每周打掃一次,先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等,然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅或者0.5%過氧乙酸擦拭。

 

2.CO2孵箱(培養(yǎng)箱)滅菌:先用3‰新潔爾滅擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%過氧乙酸,再用紫外燈照射。

 

3.實(shí)驗(yàn)前滅菌:打開紫外燈、三氧殺菌機(jī)、空氣凈化器系統(tǒng)各20~30分鐘。

 

4.實(shí)驗(yàn)后滅菌:用75%酒精(3‰新潔爾滅)擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。

 

實(shí)驗(yàn)人員的無菌準(zhǔn)備:

 

1.肥皂洗手。

 

2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋 。

 

3.用75%酒精棉球擦凈雙手。

 

無菌操作的演示:

 

1.凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面 。

 

2.靠近酒精燈火焰操作。

 

3.器皿使用前必須過火滅菌。

 

4.繼續(xù)使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處,使用時(shí)仍要過火。

 

5.各種操作要靠近酒精燈,動作要輕、準(zhǔn)確,不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。

 

6.吸取兩種以上的使用液時(shí)要注意更換吸管,防止交叉污染。

 

器械的清洗和消毒

 

玻璃器械洗消:

 

一、新的玻璃器皿的洗消:

 

1.自來水刷洗,除去灰塵。

 

2.烘干、泡鹽酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀鹽酸中12小時(shí)以除去臟物、鉛、砷等物。

 

3.刷洗、烘干:12小時(shí)后立即用自來水沖洗,再用洗滌劑刷洗,自來水沖干凈后用烤箱烘干。

 

4.泡酸、清洗:用清潔液(重鉻酸鉀120g:濃硫酸200ml:蒸餾水1000ml)浸泡12小時(shí),然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次,最后蒸餾水沖洗3~5次和用雙蒸水過3次。

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