半胱氨酸（Cys）含量檢測(cè)試劑盒（可見(jiàn)分光光度法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1047

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體25mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體45mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。用前1天，向試劑二中加5mL蒸餾水充分溶解，再加磷酸1.25mL混勻后蓋緊（防止水分散失）沸水浴2h；冷卻后加20mL 蒸餾水，4℃可保存2周。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，10mg半胱氨酸，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：

蛋白質(zhì)含有三種含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸（Cys）。其中，Cys是wei一一種含有巰基的含硫氨基酸，從甲硫氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái)，并且可與胱氨酸互相轉(zhuǎn)化。Cys參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成，經(jīng)常是蛋白質(zhì)活性中心的組成部分，還可以為其它生理生化反應(yīng)提供巰基。此外，Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面，在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性，并且補(bǔ)充巰基，以維持皮膚的正常代謝，調(diào)節(jié)表皮最下層的色素細(xì)胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過(guò)敏性皮膚等作用。

Cys還原磷鎢酸生成鎢藍(lán)，在600nm處有吸收峰；通過(guò)600nm吸光度，計(jì)算Cys含量。

需自備的儀器和用品：

低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、磷酸和蒸餾水。

操作步驟：

一、半胱氨酸提?。?

1、液體樣品中半胱氨酸提?。喝?span>0.2mL液體樣品，加提取液0.3mL，充分混勻，11000rpm4℃離心10min，取上清液，待測(cè)。

2、組織中半胱氨酸提?。悍Q取約0.2g組織，加入提取液0.5mL，冰上充分研磨，11000rpm4℃離心10min，取上清液待測(cè)。

二、測(cè)定操作：

1. 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到600nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)液的配制：將標(biāo)準(zhǔn)品加入0.826mL蒸餾水，可得到100µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，稀釋為40、20、10、8、2、1、0.5、0.25 µmol/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3. 按下表加入各試劑

三、樣品中半胱氨酸含量計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸，以?A（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）為y軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程y=kx+b。 將（A測(cè)定管-A對(duì)照管）帶入方程求x值。

2、半胱氨酸含量計(jì)算：

（1）按液體樣本的體積計(jì)算

半胱氨酸含量（µ mol/mL）=x×V樣總÷V=2.5x

（2）按鮮重計(jì)算：

半胱氨酸含量（µ mol/g鮮重）= x×V樣總÷W=0.5x÷W

V：液體樣本體積，0.2 mL；V樣總：提取體系體積，0.5mL；W：樣品質(zhì)量，g。