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酵母質(zhì)粒提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：26220

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

試劑盒采用酶法破碎酵母細(xì)胞壁和堿裂解法裂解酵母細(xì)胞來提取酵母質(zhì)粒 DNA。所采用的酵母破壁酶能有 效地破壞酵母細(xì)胞壁，提高酵母質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附 DNA，可 大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。使用本試劑盒提取的酵母質(zhì)粒 DNA 可適用于各種常規(guī)的分子 生物學(xué)實驗，包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗。本試劑盒無需使用酚等有毒試劑，操作安全。

產(chǎn)品組成：

注意：使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽。YP1 在使用前先加入 RNaseA （將 試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入），混勻，置于 2-8 ℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在 室溫下離心。

操作步驟：

1. 取 1-5ml 酵母培養(yǎng)物（不超過 5×10 7 cells），12000rpm 離心 1min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多 次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。

2. 酵母細(xì)胞壁的破除： A、酶法：向酵母菌體中加入 470ul 山梨醇 Buffer，充分懸浮菌體，加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul 巰基還原劑， 充分混勻，30℃處理 1-2h，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。12000rpm 離心 1min，棄上清，收集沉淀。向沉淀 中加入 250ulYP1（請先檢查是否已加入 RNaseA），充分懸浮沉淀。注意：如果菌塊未*混勻，會影響裂 解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。 B、玻璃珠法：向酵母菌體中加入 250ul YP1（請先檢查是否已加入 RNaseA），充分懸浮沉淀。加入 150-200ul 酸洗玻璃珠（自備），漩渦振蕩 10min。簡短離心使玻璃珠沉降到離心管底，吸取上清（如上清有所損失， 請用 YP1 補(bǔ)足至 250ul）于另一干凈離心管中。

3. 向離心管中加入 250ul YP2，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以免污染細(xì) 菌基因組 DNA，此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠，作用時間不要超過 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞。