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柱式組織基因組提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：28105

產(chǎn)品規(guī)格：100 次/200 次

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

  本試劑盒適合于從新鮮或冷凍的動(dòng)物、人組織中提取高純度總 DNA。本品可純化獲得分子量大為 50 kb 的 DNA的 片段，純化過(guò)程不需使用苯酚等有毒溶劑，無(wú)需乙醇沉淀。本試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系使 裂解液中的 DNA 高效特異的結(jié)合到硅基質(zhì)離心吸附柱上，PCR 和其他酶促反應(yīng)的抑制劑可通過(guò)兩步洗滌步驟 被有效去除，后使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可得到高純度 DNA。純化得到的 DNA 可以直接用于酶切、PCR、 Real-Time PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern Blot、分子標(biāo)記等下游實(shí)驗(yàn)。

自備試劑：無(wú)水乙醇

包裝清單： 

操作步驟：

1.如果提取材料為動(dòng)物組織，取 25 mg（脾組織用量應(yīng)少于 10 mg）；如果材料為鼠尾，取一段長(zhǎng)度為 0.4-0.6 cm 的大鼠鼠尾或兩段長(zhǎng)度為 0.4-0.6 cm 的小鼠鼠尾。

a.樣本進(jìn)行液氮研磨或切成小塊后置于 1.5 ml 離心管中，加入 180 μl Buffer GTL，將不同樣品做好標(biāo)記。

b.若使用勻漿器處理樣本，勻漿前向樣本中加入不超過(guò) 80 μl Buffer GTL，勻漿后加入 100 μl Buffer GTL。

注意：

1）確保各組織的量不要超出*范圍。

2）組織樣本在加入 Buffer GTL 之前用液氮研磨或加入 Buffer GTL 用勻漿器勻漿處理，可以增加 裂解效率。

2.加入 20 μl Proteinase K，渦旋震蕩使樣品*混勻。56℃水浴，直至組織*裂解，孵育過(guò)程中可每 隔一段時(shí)間顛倒或震蕩離心管使樣品分散。

注意：

1）不同組織消化時(shí)間不同，通常 1-3 小時(shí)即可完成，鼠尾需要消化 6-8 小時(shí)，必要時(shí)過(guò)夜消化，不會(huì)影響 后續(xù)操作。

2）如果孵育和渦旋震蕩后仍然有膠狀物質(zhì)，延長(zhǎng) 56℃孵育時(shí)間或再加入 20 μl Proteinase K 消化。

3）如需去除 RNA，可在上述步驟完成后，加入 4μl 的濃度為 100 mg/ml 的 RNase A 溶液，渦旋 15 秒，室 溫放置 5-10 分鐘。 3.加入 200 μl Buffer GL，渦旋震蕩充分混勻，70℃水浴 10 分鐘。短暫離心后加入 200 μl 無(wú)水乙醇， 渦旋震蕩充分混勻。

注意：

1）加入 Buffer GL 和無(wú)水乙醇后要立即渦旋震蕩混勻。

2）加入 Buffer GL 和無(wú)水乙醇后可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。一些組織（如脾，肺）在加入 Buffer GL 和無(wú)水乙醇后可能形成溶膠狀產(chǎn)物，此時(shí)*進(jìn)行劇烈震蕩或渦旋處理。

4.柱平衡：向已裝入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入 200μl Buffer PS， 12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

5.將步驟 3 所得溶液短暫離心，全部加入到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns）中，若一次不能加完 溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12000 rpm 離心 1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

6.向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12000 rpm 離心 1 分鐘， 倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

注意：如果純化的 DNA 用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)（例如平末端連接或直接測(cè)序），建議加入 Buffer PW 靜置 2-5 分 鐘再離心。

7.重復(fù)步驟 6。

8.12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液。

注意：

這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR 等）。

9.將吸附柱放到一個(gè)新的 1.5 ml 離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加 50μl Buffer EB，室溫 放置 2 分鐘。12000 rpm 離心 1 分鐘，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

注意：

1）洗脫液的 pH 值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5 之間（可以用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)到此范圍）。

2）為了提高基因組提取量，可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000 rpm 離心 1 分鐘。

3）洗脫體積不應(yīng)小于 30μl，體積過(guò)少會(huì)影響回收效率。

注意事項(xiàng) ：

1.*使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在 Buffer PW 中加入無(wú)水乙醇（Buffer PW 100 次包裝 18ml，使 用前加入 72ml 無(wú)水乙醇；Buffer PW 200 次包裝 18ml，使用前加入 144ml 無(wú)水乙醇）；

2.所有離心步驟均可室溫下進(jìn)行。